Actividad antioxidante

ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE: ENSAYO DEL RADICAL DPPH

Fundamento

La prueba se basa en la reducción del radical 2,2-difenil,1-picrilhidrazil (DPPH) por acción de alguna sustancia antioxidantecomo vitamina C, vitamina E, vitamina A, entre otros, La reducción del DPPH se mide a 517 nm por la disminución del color violeta del radical, cuando este se pone en contacto con la sustanciaantioxidante. Los resultados se expresan como porcentaje de actividad antioxidante de la sustancia tomando como base (100%) la densidad óptica del reactivo de DPPH solo.

ReactivosSolución de DPPH 300 μM

DPPH…………………3 mg

Etanol absoluto…….. 25 mL

Disolver el DPPH y aforar a 25 mL de etanol. Guardar en frasco color ambar,, El reactivo se prepara en el momento de su usoEstándar de vitamina C 70 μM

Vitamina C …………0.123 mg

Etanol absoluto …… 10 mL

Método

1. Etiquetar un tubo como Blanco reactivo (B)

2. Etiquetar un tubo para solucióncontrol de vitamina C( C)

3. Etiquetar un tubo para solución problema (jugo frutal de su elección)

4. Adicionar 500 μL de reactivo DPPH a cada tubo

5. Adicionar 500 μL deetanol al blanco de reactivo

6. Adicionar 500 μL de solución de vitamina C al tubo control

7. Adicionar 500 μL de solución problema previamente diluída en etanol absoluto 1:108. Mezclar, dejar reposar por 30 minutos en la oscuridad y a temperatura ambiente

9. Leer la D.O. a 517 nm contra blanco de reactivos (metanol)

10. En caso necesario preparar unblanco de muestra para cada dilución de jugo a analizar




Calculos:

% de inhibición = D.O. muestra problema X 100

D.O.Estándar




Actividad antioxidante = 100 - % inhibición



NOTA: En caso de que requiera utilizar el blanco de muestra se deberá restar a la D.O de la muestra problema