Actividad De Amilasa

6 DE FEBRERO DEL 2013


PRACTICA No. 1
DETERMINACIÓN CUANTITATIVA DE LA ACTIVIDAD DE AMILASA EN LÍQUIDOS BIOLÓGICOS
OBJETIVOS:
Determinar cuantitativamente la actividad de amilasa en líquidos biológicos mediante el método amiloclástico yodométrico.

INTRODUCCIÓN:
La mayoría de los carbohidratos utilizados como alimentos son polisacáridos de elevado peso molecular formados por laagregación de moléculas de glucosa. El más importante de ellos, por lo menos en lo que hace referencia al hombre, es el almidón.
El almidón natural, tal como aparece en las semillas y se almacena en los órganos de depósito de las plantas, esta constituido por dos componentes, la amilosa y la amilopectina. En la amilosa se condensan doscientas o mas moléculas de glucosa para formar una cadenalarga, no ramificada. Se unen por enlaces del tipo 1:4-alfa-glucosídocos.
Las enzimas encargadas de catalizar específicamente la hidrolisis de enlaces 1:4-alfa-glucosídocos de los polisacáridos como el almidón y el glucógeno son las amilasas. No atacan otros tipos de enlaces. Son muy abundantes en la naturaleza, tanto en los vegetales como en diversos tejidos de animales. (E.O’F. Walsh (1971)Introducción a la bioquímica)
A diferencia de la celulosa, al almidón puede ser digerido por los seres humanos ( y por la mayoría de los organismos) debido a la presencia de amilasa salival y amilasa pancreática en las secreciones digestivas, las cuales, en acción combinada con otras enzimas digestivas, degradan por completo el almidón a alfa-D-glucosa, la cual es absorbida y metabolizadaposteriormente. (Lehinnger A. L ( 1995) Bioquímica)
Amilasa salival: La presencia de una amilasa en la saliva humana fue demostrada por Leuchs en 1932. Se trata de un enzima relativamente estable y que se ha aislado en forma cristalina. La amilasa salival se activa por iones de cloruro y tiene un pH de acción optimo a 6.8 a 6.9. En general es rica en amilasa la saliva de los omnívoros, mientrasque los carnívoros y los herbívoros poseen escasa o nula actividad amilásica.
Amilasa pancreática: El páncreas del hombre y del cerdo segregan un jugo pancreático particularmente rico en amilasas. El almidón nativo o bruto es atacado escasamente por la amilasa salivar. Se puede decir que la digestión del almidón cocido se inicia en la boca y continua en el estomago, hasta que la actividadamilásica se suprime por la caída del pH, a medida que la mezcla de alimentos y saliva se va impregnando lentamente en el jugo gástrico… (E.O’F. Walsh (1971) Introducción a la bioquímica)

Aplicaciones diagnósticas:
La medición de la actividad enzimática en líquidos corporales como el plasma o suero es a menudo de importancia clínica. Las enzimas plasmáticas no funcionales, los substratos ycofactores de las cuales pueden de hecho faltar en el plasma, aparentemente no tienen función en él. Sus niveles normales en este liquido son bajos hasta un millón de veces menores que los que se encuentran en los tejidos. En este grupo podemos distinguir entre las enzimas exocrinas -la amilasa pancreática. Los niveles bajos de enzimas no funcionales que se encuentran normalmente en el plasma,aparentemente tienen su origen en la destrucción rutinaria normal de los eritrocitos leucocitos y otras células.
La amilasa plasmática puede estar baja en las enfermedades hepáticas y aumentada en la obstrucción intestinal alta, parotitis pancreatitis agua y diabetes. ( Dr. Harper H. A. (1971) Manual de química fisiológica.)

REACTIVOS:
* Suero sanguíneo u orina
* Solución de almidón500mg/L, tamponada a pH 7 con buffer fosfatos 0.1M en NaCl 0.15M
* Reactivo de yodo (0.10 eq/L de yodo en ácido clorhídrico 0.02M)
MATERIAL:
* Baño de agua
* Tubos de ensaye
* Micropipetas
* Espectrofotómetro
* Pipetas serológicas

PLANTEAMIENTO:
El sustrato almidón tamponado, se incuba con la muestra,...