ACTIVIDAD ENZIMÁTICA DE LA AMILASA


Nombre: Lizeth Salazar, Daniela Sánchez, Karla Vizuete, José Álvarez
Materia: Enzimología
Practica N°: 1 Fecha: 03-04-2013 Curso/Paralelo: 5to. “A”
1. TEMA: “ACTIVIDAD DE LA AMILASA”

2. OBJETIVOS:
2.1. Objetivo General:
Determinar la actividad de la amilasa en elsuero de la sangre.
2.2. Objetivos Específicos:
Obtener a partir de datos experimentales la curva de calibración del almidón.
Establecer la concentración de almidón en la muestra experimental de suero sanguíneo y la muestra control.
Analizar la actividad enzimática de la amilasa en el suero de la sangre durante el tiempo de incubación.

3. MARCO TEÓRICO:
Los enzimas son proteínas quetienen la función de acelerar reacciones químicas en sistemas biológicos. Muchas reacciones necesarias para las células vivas no se producirían con la suficiente rapidez a la temperatura y pH del cuerpo sin enzimas (Devlin, 2004).
Las amilasas con enzimas que hidrolizan el almidón, glucógeno y otros oligosacáridos semejantes, dando glucosa y maltosa como productos finales de la hidrolisis. Laamilasa se produce predominantemente en las glándulas salivales y en el páncreas exocrino (Díaz et al, 2000).
La hiperamilasemia es un exceso de la enzima pancreática amilasa en la sangre. Cuando el páncreas se inflama, los niveles de amilasa y lipasa (enzimas pancreáticas) en sangre, aumentan. El nivel normal de amilasa es de 0 a 137 U/L, sin embargo, estos valores pueden variar según ellaboratorio. 

4. MATERIALES Y MÉTODOS:
4.1. MATERIALES DE PROTECCIÓN PERSONAL
Mandil
Guantes
Vestimenta apropiada
4.2. INSUMOS
Soporte con probetas de centrifuga
Probetas de centrífuga
Pipeta 10ml
Micropipetas de 0.1 ml
Termostato (37 C)
Centrifuga eléctrica
Matraces aforados de 50 ml
Fotoelectrocolorímetro
Celdas para el fotoelectrocolorímetro
Probetas de 50ml
Vaso de precipitaciónde 50ml
4.3. REACTIVOS
Almidón soluble, disolución al 1%
Cloruro sódico, disolución 0,5 M
Mezcla de disolución de almidón al 1% con disolución de cloruro sódico 0.5 M.
Disolución amortiguadora de fosfato, pH 7.2
Ácido clorhídrico, disolución 1N.
Iodo, disolución al 0.3% en disolución de ioduro potásico al 3%.
4.4. PROCEDIMIENTO
4.4.1. Curva de Calibración
Para trazar la curva decalibración en 5 matraces aforados de 50 ml se vierten de 30 a 40 ml de agua. Añadir 0,5; 1,0; 2,0; 3,0; 4,0 ml de disolución de almidón. Agregar 0,5 ml de disolución de ácido clorhídrico, 0,1 ml disolución de iodo, el contenido se lleva con agua hasta la raya de enrase y se mezcla. Al cabo de 5 min la coloración se mide en fotoelectroclorímetro con respecto al agua en las cubetas de 1 cm dedistancia entre las cara de trabajo, usando el filtro de luz rojo (618 – 780 nm).

4.4.2. Marcha de los trabajos
En dos probetas de centrífuga se vierten 0,5 ml de mezcla de disoluciones de almidón con cloruro sódico y 0,3 ml de mezcla amortiguadora de fosfato. Añadir 0,1 ml de suero de la sangre en la probeta 1 (experimental) y en la probeta 2 (control) 0,1 ml de agua destilada. Incubar ambasprobeta en el termostato (37 C) durante 30 min. Añadir en ambas probetas 0,1 ml de disolución de ácido clorhídrico y centrifugar durante 1 min a 1500 r.p.m. Verter en dos matraces aforados de 50ml, en cada uno, de 30 a 40 ml de agua, se añaden 0,2 ml de líquido centrifugado y se realizarla reacción coloreada como se ha descrito anteriormente, para el trazado de la curva de calibración.

5.RESULTADOS PRIMARIOS
5.1. CÁLCULOS PARA LA PREPARACIÓN DE LOS REACTIVOS

Almidón soluble disolución al 1%




Se disuelve 1 g de almidón en un volumen de solución de 100 ml.

Ácido clorhídrico disolución 1N















La masa de HCl puro es de 9,1125 g HCl

Masa de HCl al 37% de pureza= g HCl










Para realizar la disolución de ácido clorhídrico 1N...