Actividad Enzimática De La Amilasaaa



“Actividad enzimática de la a-amilasa salival”




Nombre: Fabián Rojas.
Daniela Castillo.
Sara Navarro.
Katherine Reuque.Resumen
En este laboratorio se podrá demostrar cualitativamente la acción de la α-amilasa salival sobre el almidón, comprobando quelos productos resultantes de la acción enzimática son reductores y no dan positiva la reacción del lugol que sirve para demostrar la presencia de almidón.Introducción

Con este informe se quiere dar a conocer en forma práctica la hidrolisis de almidón por medio de la a-amilasa salival y como esta última actúa sobre los enlaces glicosidicos delalmidón, liberando posteriormente azucares reductores.













Metodología

A. Obtención de laenzima -amilasa:
1. Después de enjuagar la boca con agua de la llave recoger saliva en un tubo de ensayo hasta obtener aproximadamente 1 ml.
2. La saliva así obtenida se diluye con 10 mL de aguadestilada, así se obtiene la preparación de enzima base. Rotular este tubo como “Enzima” y mantenerlo en un baño de agua fría.
B. Efecto de la presencia de NaCl sobre la amilasa.
1. Prepara 4 tubosde ensayo con los siguientes reactivos:
tubo
A.1
B.1
A.2
B.2
almidón al 0,5% p/v
1mL
1mL
1mL
1mL
Buffer fosfato pH=6,8
1mL
1mL
1mL
1mL
Agua Destilada
-------
1mL
------
1mL
NaCl 1%1mL
-------
1mL
------
Saliva diluída
1mL
1mL
1mL
1mL


2. Agitar los tubos e incubar durante 10 min en un baño a 37° C. Transcurrido ese tiempo se sacan del baño y se agrega lugol o reactivo deFehling A y B de acuerdo al siguiente cuadro para determinar la presencia de almidón y de azúcares reductores.

Prueba para detectar:
Almidón
Azucares Reductores
Tubos
A.1
B.1
A.2
B.2
Lugol
2 gotas...