actividad enzimática

ACTIVIDAD ENZIMÁTICA: ACTIVIDAD PEROXIDASA

Las peroxidasas son un grupo de enzimas localizadas principalmente en la pared celular, en las vacuolas y en el citoplasmade las células vegetales. Son muy importantes por sus funciones catalíticas. Intervienen principalmente en la oxidación de ácido indolil acético, inactivando esta hormona;hidroxilación de prolina y procesos de lignificación y resistencia a
infecciones por microrganismos patógenos, aumentando la hifrofobidad de la pared celular yprotegiéndola. En el laboratorio se utiliza como donador y aceptor genérico el guayacol, que al oxidarse toma un color marrón.
Se toman 0.5 g de muestra vegetal y se homogeniza con5 ml de tampón de extracción(tampón fosfato 50 mM, pH 7) en un mortero con arena. Se filtra y se centrifuga durante 5 min a 16000g.
Para realizar la medida, utilizaremoscomo blanco agua destilada. En una cubeta de colorímetro se vierten en el siguiente orden:
• 2,65 ml de tampón de reacción
• 0,3 ml de la solución de guayacol
Acontinuación añadimos el extracto y rápidamente medimos la absorbancia a 470 nm y se toman los datos cada 30 s.






Cuestiones
En las dos prácticas se miden loscambios en las muestras a partir de las diferencias en el color, utilizando en ambas el colorímetro. En la primera práctica se midió la concentración de proteínas en diferentesmuestras. En la segunda se miden los cambios producidos en una reacción química.
Son diferentes, ya que las especies contienen diferente cantidad de enzimas.

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