Actividad enzimatica de la Amilasa
Páginas: 10 (2254 palabras)
Publicado: 26 de junio de 2014
Acción enzimatica según el sustrato
RESUMEN: Las enzimas son catalizadores proteicos que aceleran las velocidades de las reacciones, tienen una temperatura y pH optimo en la que su actividad es máxima, es por esto que su funcionamiento se ven afectado al cambio de estos dos factores, incluso si la temperatura llega a subir a un nivel extremo puede desnaturalizar a la enzima de formairreversible. Mediante un test colorimétrico con Lugol y almidón se midieron las absorbancias de cinco muestras a diferentes concentraciones y se construyó una curva de calibración, con la que se pudo corroborar, que se cumplía la ley de Lambert –Beer. Observamos también la actividad enzimática α-amilasa salival sobre el almidón, según la desaparición de sustrato medido a través de la absorbancia conun espectrofotómetro, a diferentes temperaturas. Se comprobó empíricamente que se cumple la teoría; de que la temperatura afecta a la velocidad de las reacciones. Y mediante el proceso de elaboración de los experimentos, se hicieron explícitos los errores que afectan a los resultados. La α-amilasa en una enzima de tipo compleja, pancreática requiere del cofactor ión calcio.
Palabras clave:Actividad enzimática, catalizadores, termolabilidad y hidrólisis.
INTRODUCCION
Las enzimas catalizan todas las reacciones biológicas, incrementando la velocidad de las reacciones, casi todas son proteicas y requieren de un grupo prostético que le confiere una función en especial.
Los cofactores son pequeñas moléculas orgánicas esenciales para la catálisis por ejemplo la α-amilasapancreática requiere de el cofactor aniónico del ion cloruro y la α-amilasa salival del ión calcio.
Las coenzimas son casi siempre derivadas de una vitamina y algunas están tan unidas a la porción proteica de la enzima que se puede desnaturalizar si se las separa.1 (Montgomery, 1999)
La α-amilasa salival o llamada también ptialina, es producida por la glándula parótida, esta rompe de dos endos, los enlaces α-1,4 de la estructura del almidón resultando en disacáridos maltosa. Pero su acción es de corta duración. El pH óptimo de la α-amilasa salival es cercano a 7, es por esto que cuando el bolo alimenticio llega al estomago su actividad se suspende.2 (Peña, 2004)
Esto se explica porque el pH del estomago al ser más acido afecta al estado iónico de la enzima debido al carácter proteicoque esta tiene afectando así a su función.
Otro factor que afecta a la función enzimática es la temperatura, la que al subir va a acelerar la reacción hasta llegar a un punto en que se producirá la desnaturalización, la cual es irreversible, esto ocurre en la mayoría de las enzimas, por lo tanto cada enzima tiene un pH y una temperatura optima en la que su actividad es máxima.
La α-amilasaes de tipo hidrolasa que catalizan la escisión de enlaces entre un átomo de carbono y otro átomo por adición de agua.3 (Montgomery, 1999)
Además las enzimas poseen un sitio catalítico activo donde la porción específica del sustrato se ajusta para que se produzca la hidrolisis del enlace.
Seguiremos la reacción de la enzima α-amilasa salival detectando la desaparición de sustrato mediante untest colorimétrico con Lugol para determinar la presencia de almidón, el cual posee una estructura helicoidal de la amilosa donde ingresa el Lugol dando una coloración azul intensa. Por lo tanto si la α-amilasa salival hidroliza a la amilosa no dará esta coloración.
MATERIALES
1.- 1 Gradilla
2.- 10 tubos de ensayo
3.- 2 Micropipetas
4.- 3 vasos de precipitado (200µl y 1000µl)5.- 3 vasos de precipitado (50ml o 100ml)
6.- Baño de hielo (0°C)
7.- Baño termoregulado (90°C)
8.- Estufa (37°C)
9.- 1 cubeta para epectrofometría
10.- Espectrofotometro
11.- Solución de Lugol
12.- Solución de almidón (2%)
13.- Agua destilada
14.- Saliva humana
15.- Solución salina fisiológica (0,9%)
PROCEDIMIENTO
Se recolecto 5 ml de saliva, la cual se diluyo con...
RESUMEN: Las enzimas son catalizadores proteicos que aceleran las velocidades de las reacciones, tienen una temperatura y pH optimo en la que su actividad es máxima, es por esto que su funcionamiento se ven afectado al cambio de estos dos factores, incluso si la temperatura llega a subir a un nivel extremo puede desnaturalizar a la enzima de formairreversible. Mediante un test colorimétrico con Lugol y almidón se midieron las absorbancias de cinco muestras a diferentes concentraciones y se construyó una curva de calibración, con la que se pudo corroborar, que se cumplía la ley de Lambert –Beer. Observamos también la actividad enzimática α-amilasa salival sobre el almidón, según la desaparición de sustrato medido a través de la absorbancia conun espectrofotómetro, a diferentes temperaturas. Se comprobó empíricamente que se cumple la teoría; de que la temperatura afecta a la velocidad de las reacciones. Y mediante el proceso de elaboración de los experimentos, se hicieron explícitos los errores que afectan a los resultados. La α-amilasa en una enzima de tipo compleja, pancreática requiere del cofactor ión calcio.
Palabras clave:Actividad enzimática, catalizadores, termolabilidad y hidrólisis.
INTRODUCCION
Las enzimas catalizan todas las reacciones biológicas, incrementando la velocidad de las reacciones, casi todas son proteicas y requieren de un grupo prostético que le confiere una función en especial.
Los cofactores son pequeñas moléculas orgánicas esenciales para la catálisis por ejemplo la α-amilasapancreática requiere de el cofactor aniónico del ion cloruro y la α-amilasa salival del ión calcio.
Las coenzimas son casi siempre derivadas de una vitamina y algunas están tan unidas a la porción proteica de la enzima que se puede desnaturalizar si se las separa.1 (Montgomery, 1999)
La α-amilasa salival o llamada también ptialina, es producida por la glándula parótida, esta rompe de dos endos, los enlaces α-1,4 de la estructura del almidón resultando en disacáridos maltosa. Pero su acción es de corta duración. El pH óptimo de la α-amilasa salival es cercano a 7, es por esto que cuando el bolo alimenticio llega al estomago su actividad se suspende.2 (Peña, 2004)
Esto se explica porque el pH del estomago al ser más acido afecta al estado iónico de la enzima debido al carácter proteicoque esta tiene afectando así a su función.
Otro factor que afecta a la función enzimática es la temperatura, la que al subir va a acelerar la reacción hasta llegar a un punto en que se producirá la desnaturalización, la cual es irreversible, esto ocurre en la mayoría de las enzimas, por lo tanto cada enzima tiene un pH y una temperatura optima en la que su actividad es máxima.
La α-amilasaes de tipo hidrolasa que catalizan la escisión de enlaces entre un átomo de carbono y otro átomo por adición de agua.3 (Montgomery, 1999)
Además las enzimas poseen un sitio catalítico activo donde la porción específica del sustrato se ajusta para que se produzca la hidrolisis del enlace.
Seguiremos la reacción de la enzima α-amilasa salival detectando la desaparición de sustrato mediante untest colorimétrico con Lugol para determinar la presencia de almidón, el cual posee una estructura helicoidal de la amilosa donde ingresa el Lugol dando una coloración azul intensa. Por lo tanto si la α-amilasa salival hidroliza a la amilosa no dará esta coloración.
MATERIALES
1.- 1 Gradilla
2.- 10 tubos de ensayo
3.- 2 Micropipetas
4.- 3 vasos de precipitado (200µl y 1000µl)5.- 3 vasos de precipitado (50ml o 100ml)
6.- Baño de hielo (0°C)
7.- Baño termoregulado (90°C)
8.- Estufa (37°C)
9.- 1 cubeta para epectrofometría
10.- Espectrofotometro
11.- Solución de Lugol
12.- Solución de almidón (2%)
13.- Agua destilada
14.- Saliva humana
15.- Solución salina fisiológica (0,9%)
PROCEDIMIENTO
Se recolecto 5 ml de saliva, la cual se diluyo con...
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