Actividad enzimatica de la catalaza

ACTIVIDAD ENZIMATICA DE LA CATALASA

ESTUDIANTES Juan Pablo Leal Guarnizo (070100092008) Jorge Alberto Mendez (070150302008) Carlos Alberto Guarnizo Hincapie (070150152002) Cristhian Camilo conde (070100382008) Cediel Lozano (070100 2008)

DOCENTE Enrique Alirio Ortiz

UNIVERSIDAD DEL TOLIMA PROGRAMA DE BIOLOGIA FACULTAD DE CIENCIAS IBAGUE 2009

RESULTADOS

Tabla Nº 1

Tubo

A H2O2Inicial µmol 1.2 X10-4 1.2 X10-4 1.2 X10-4 1.2 X10-4 -4 1.2 X10 1.2 X10-4 4 X10-5 8 X10-5 1.2 X10-4 1.6 X10-4 2 X10-4 2.4 X10-4

B KMnO4 µmol 1 X10-6 2 X10-6 2 X10-6 3 X10-6 -6 2.5 X10 3.5 X10-6 2 X10-6 1.5 X10-6 2 X10-6 1.5 X10-6 5 X10-7 1.5 X10-6

C H2O2 titulado µmol 2.5 X10-6 5 X10-6 5 X10-6 7.5 X10-6 -6 6.25X10 8.75X10-6 5 X10-6 3.75 X10-6 5 X10-6 3.75 X10-6 1.25 X10-6 3.75 X10-6

DH2O2 convertido 1.17 X10-4 1.15 X10-4 1.15 X10-4 1.125 X10-4 -4 1.37 X10 1.1125 X10-4 3.5 X10-4 7.625 X10-4 1.15 X10-4 1.5625 X10-4 1.9875 X10-4 2.3625 X10-4

E 1/[S] 1/A

F V= [D]/t

G 1/V

B 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11

8.33 X103 8.33 X103 8.33 X103 8.33 X103 3 8.33 X10 8.33 X103 2.5 X104 1.25 X104 8.33 X103 6.25 X103 5 X103 4.1 X103

1.67 X10-5 1.64 X10-5 1.64 X10-5 1.60 X10-5 -5 1.95 X101.58 X10-5 5 X10-6 1.08 X10-5 1.64 X10-5 2.22 X10-5 2.82 X10-5 3.37 X10-5

5.9 X104 6 X104 6 X104 6.2 X104 4 5.1 X10 6.3 X104 2 X105 9.2 X104 6 X104 4.5 X104 3.5 X104 2.9 X104

De acuerdo con los resultados:

1. Calcular la actividad enzimática en µmol/min.

Tubo B 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11

V= [D]/t -5 1.67 X10 -5 1.64 X10 -5 1.64 X10 -5 1.60 X10 1.95 X10-5 -5 1.58 X10 -6 5 X10 1.08X10-5 1.64 X10-5 2.22 X10-5 2.82 X10-5 3.37 X10-5

2. Discutir el efecto de los diferentes agentes físicos y químicos del tubo 1 al 5 y compararlos con el tubo 8. Agentes físicos y químicos del tubo 1 y 2 con respecto al 8. Para este caso la concentración inicial de H 2O2, fue de 1.2 X10-4 µmol con 4 ml de un buffer de pH= 6. La cantidad de H2O2 que se unió al sitio activo de la enzima fue de 1.15X10-4 y la velocidad fue de 1.64 X10-5, un valor medio en comparación con los demás tubos, el efecto del pH sobre las enzimas esta relacionado con los cambios bruscos de estos valores. Todas las enzimas presentan una eficacia a un pH óptimo pues los cambios que se produzcan pueden desnaturalizar la enzima y modificar la carga eléctrica de esta o de los sustratos; a un pH bajo como este, si lacarga de la enzima es negativa y el sustrato es positivo, la enzima se protona y pierde su carga negativa, alterando la conformación de la catalasa, en este caso, y por consiguiente su velocidad. Los resultados obtenidos para el tubo 8 fueron los mismos, esto pudo deberse a que el cambio del pH para el tubo 1 no fue tan brusco como para desnaturalizar la enzima y afectar en gran medida su efectividad,otra razón por la que los resultados son tan similares puede ser que los dos presentan concentraciones iniciales de sustrato eran iguales(1.2 X10 -4 µmol) y la velocidad es directamente proporcional a la concentración del sustrato por lo que es el sustrato el que determina principalmente la acción enzimática. Lo mismo sucede con el tubo 2 que contiene 4 ml de buffer pH = 8 y la velocidad es iguala la del tubo uno y ocho. El pH no fue suficiente para inhibir la reacción, y las concentraciones de H2O2 si eran las mismas Agentes físicos y químicos del tubo 3 con respecto al 8 Datos: TUBO 3: Buffer 7:4ml; H2O2; catalasa calentada ml; 1ml . TUBO 8: Buffer 7:4ml; H2O2:3; catalasa ml 1. Ml.

La solución buffer o tampón esta es pH = 7 y presenta una concentración de sustrato de 1.2 X 10-4,igual que el tubo tres, pero la gran diferencia es la presencia de un determinante factor físico que afecta la acción de la catalasa en el tubo tres como lo es el calor. Partiendo del hecho de que toda enzima posee una temperatura óptima de acción, se dice que comenzando con una baja temperatura y a medida que esta aumente la actividad enzimática también aumentará, pero hasta que alcance un punto...