actividad enzimatica



Actividad enzimática: amilasa salival



Integrantes
Michael Alfaro Vega
Katherine Concha López
Victoria Monsalve Gatica



Desarrollo
Experimento 1: Determinación de la Actividad Enzimática

1) Tomar 2 tubos de ensayo con 3 ml de solución neutra de almidón 2 % (p/v).
2) Manteniendo los tubos con el almidón (sustrato) a 37°C agregarle 1 ml de la saliva diluida (enzima) alprimer tubo y 1 ml de ssf al segundo tubo; mezclar suavemente.
3) Incubar por 10 min a 37°C.
4) Detener la reacción con 500 µl de NaOH 0,1 M.
5) Añadir 500 µl de lugol.
6) Realizar la lectura de la absorbancia en el espectrofotómetro a 590 nm.
7) Determinar la concentración de almidón en cada tubo
Tubos
 
Absorbancia
1
Saliva
1,32
2
SSF
2,1

Experimento 2: Efecto de la temperaturasobre la actividad enzimática
1) Tome 4 tubos de ensayos. Añada a cada uno 1 ml de solución saliva diluida.
2) Agregue a cada tubo 3 ml de solución de almidón 2%, mezclar suavemente.
3) Incubar por 10 min a la temperatura correspondiente.
4) Detener la reacción con 500 µl de NaOH 0,1 M.
5) Realizar la lectura de la absorbancia en el espectrofotómetro a 590 nm.
6) Determinar la concentraciónde almidón en cada tubo.
Tubos
Temperatura °C
Absorbancia
1
0
1,58
2
ambiente
1,612



3
37
1,97
4
90
0,815







A partir de los datos obtenidos responda
1) ¿Qué efectos tienen y como afectan la actividad enzimática el realizar la reacción a 0°C, temperatura ambiente, 37°C y 90°C?
Respuesta: Las enzimas para poder llevar a cabo su acción necesitan una temperaturaóptima, la cual es a los 37° C, es decir es en este punto donde la enzima está actuando más eficazmente. En cambio a los 0° C no hay actividad enzimática ya que las moléculas reactantes no poseen suficiente energía cinética para llevar a cabo la reacción de la enzima. Al aumentar la temperatura hasta los 90° C la enzima se ha desnaturalizado, por lo que la actividad enzimática decae rápidamente hastaanularse.

2) ¿Qué efectos tienen y como afectan la actividad enzimática el tratamiento de la saliva con NaCl?
Respuesta: En presencia de NaCl la actividad enzimática de la amilasa aumenta puesto que necesita un tiempo menor al del central para lograr el efecto acromático. Se podría suponer que Na+ o Cl- pueden afectar la acción enzimática de la alfa amilasa

3) ¿A qué pH y a quetemperatura esperaría Ud. que la α-amilasa tuviera su actividad óptima? ¿Por qué?
Respuesta:
PH: 7.0
Porque cada enzima posee un pH característico donde puede realizar su función (pH óptimo) y cualquier variación del mismo puede afectar la velocidad de la reacción química catalizada
T°: 25°C
Dado que las enzimas son estructuras proteicas pueden ser desnaturalizadas a medida que aumenta la T° yperder así su actividad biológica. La temperatura en la cual se desarrolla la máxima actividad enzimática se denomina como óptima.

4) ¿Qué experimento demostraría que la actividad de la α-amilasa se debe a la presencia de una proteína?
Para medir la actividad enzimática de la a-amilasa, se utilizará un test colorimétrico que detecta el almidón. Para ello se contará con una solución deiodo/ioduro de potasio (I2/IK), ya que el almidón en presencia de esta solución adquiere una coloración azulada característica, el iodo se coloca en el interior de la hélice que forma la amilasa (en las regiones hidrofóbicas), formando un complejo de color azul. Cuando la a-amilasa actúa, degrada la amilasa, se desintegra la hélice y por tanto en presencia de I2/IK ya no dará una coloración azul.
Por lotanto, este Test mide la desaparición de sustrato (evidenciada por el test colorimétrico) para determinar la actividad de la enzima.
5) Explique las modificaciones a nivel molecular que experimentan las enzimas al variar el pH.
Efecto del pH
La dependencia del pH usualmente refleja el ambiente en el cual la enzima es activa.
Arriba del pH óptimo, se rompen los enlaces iónicos. También...