actividad enzimatica

UNIVERSIDAD PERUANA CAYETANO HEREDIA
FACULTAD DE CIENCIAS Y FILOSOFÍA
DEPARTAMENTO ACADÉMICO DE
CIENCIAS BIOLÓGICAS Y FISIOLÓGICAS

Curso: BL1022 Biología I
Práctica # 3
Actividad enzimática - Catalasa
Los principios de la termodinámica ayudan a predecir si una reacción ocurrirá o
no, pero no indican nada acerca de la velocidad con que sucede la reacción
misma. Las células regulan lasreacciones químicas con enzimas, catalizadores
proteínicos que aceleran la velocidad de las reacciones sin consumirse en éstas.
Hay que tener en cuenta que las enzimas, al igual que cualquier catalizador, no
pueden hacer que una reacción proceda en una dirección termodinámicamente
desfavorable, o influir en la concentración final de reactivos y productos si la
reacción llega al equilibrio.
Engeneral las enzimas funcionan mejor en algunas condiciones estrechamente
reguladas, que se denominan óptimas, y comprenden temperatura, pH y
concentración de sales adecuadas. Cualquier desviación respecto de estas
condiciones tiene efecto adverso en la actividad enzimática.
En la presente práctica observaremos la actividad enzimática de la catalasa,
presente en los peroxisomas de célulasanimales y vegetales.
La catalasa actúa sobre el peróxido de hidrógeno (H2O2) y promueve la
descomposición de esta sustancia tóxica para las células según la siguiente
ecuación:
2 H2O2

2 H2O + O2

Estudiaremos el efecto de la temperatura, pH y concentración (de la enzima) sobre
la actividad de la catalasa de hígado de pollo y de tomate. La actividad de la
enzima será evidenciada por laformación de burbujas de O2 en el tubo de ensayo.
Materiales
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Hígado de pollo en trozos y triturado, colocados en vasos de teknoport de 2
onzas y mantenidos en una caja de teknoport con hielo para evitar la
degradación de la catalasa
Tomate en trozos y triturado, colocados en vasos de teknoport de 2 onzas
mantenidos en hielo
2 cucharitas por grupo de asa larga y adaptadas para laincorporación de
los tejidos a los tubos de ensayo
12 tubos de ensayo 15 x 150 mm

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Plumón indeleble para marcar los tubos y pipetas de 5 mL
Pipetas graduadas de 5 mL (2 por grupo) con dispensador (1 por grupo)
Peróxido de hidrógeno
Agua destilada en un beaker pequeño
Hielo triturado mantenido en un vaso de teknoport grande, para mantener
lasmuestras de tejido a 5ºC
NaOH 1N
HCl 1 N
2 Gradillas portatubos por grupo
Cocinilla eléctrica con agua en ebullición conteniendo un soporte de tubos
de prueba ( 1 por aula)
1 Pinza de madera por grupo
1 termómetro que registre temperaturas de 5ºC por grupo
1 tubo de prueba de 5 mL para mantener el peróxido de hidrógeno a 5ºC
(por grupo)
Papel toalla (1/2 rollo por aula)
Tiras de pH (3tiras por grupo)

1. Procedimiento
Este experimento se hará en grupos de 3 ó 4 estudiantes.
a) Caracterización de la actividad de la catalasa:
1) Rotule adecuadamente los tubos de ensayo del 1 al 5
2) Agregue 1 mL de agua destilada al tubo # 1, será un control que no
contendrá tejidos.
3) Según la tabla siguiente agregue a cada tubo la muestra de hígado o de
tomate (entero o triturado segúncorresponda) en cantidad equivalente a 1
cm3, lo cual corresponde a 1 o 2 trocitos de hígado/tomate en el caso de las
muestras enteras y a 1mL de los mismos en el caso de la muestra triturada.
4) Tenga presente que en el siguiente paso usted debe cuantificar la
intensidad de la reacción enzimática. Para eso tendrá que evaluar la
formación de burbujas.
5) El desprendimiento de burbujas seregistrará según la escala mostrada a
continuación:
0 = no hay reacción
1 = reacción lenta (burbujeo mínimo)
2 = reacción moderada (burbujeo abundante pero lento)
3 = reacción rápida (burbujeo abundante y rápido)
4 = reacción muy rápida (burbujeo muy abundante y muy rápido)
6) Organice su grupo, una persona debe colocar el sustrato (peróxido de
hidrógeno), otra persona debe estar lista para...