Actividad enzimatica

¿Cómo se puede determinar la actividad enzimática?

Las enzimas son proteínas especializadas que sirven como biocatalizadores para casi todas las reacciones químicas en un organismo vivo. Laactividad enzimática es la velocidad a la que una enzima completa una reacción química y produce un producto químico final. La actividad específica de una enzima describe la velocidad enzimática pormiligramo de enzima y se puede determinar por variados métodos:
Método colorimétrico con precipitación de proteínas con TCA: Este método consiste en hidrolizar un sustrato como la caseína, luego seprecipitó la proteína con TCA (ácido tricloro acético) al 30%, una vez precipitada y filtrada la proteína, se leyó el sobrenadante aminoácidos) por espectrofotometría a 280nm.
Método de coagulación deleche (Balls and Hoover): Se determina el tiempo de coagulación de una muestra de 10 ml de leche descremada, luego de agregada una determinada concentración de enzima. Se mide el cambio de Ph durante laacción de la enzima.
Método del BAPA (colorimétrico): Se disuelve el sustrato BAPA en buffer tris 0.05M y Ph 8
El BAPA (Benzoil - arginina - Paranitroanilina) en presencia de una proteasa sedescompone obteniéndose la p-nitroanilina que tiene una coloración amarilla. El cambio de coloración y la intensidad depende de la actividad de la enzima. Las muestras se miden en un espectrofotómetro a410 nm luego de un tiempo de 6 hrs. A 25°C






¿Qué factores influyen en la activación de un enzima?

Los factores que influyen en la activación de una una enzima independiente de cual season pH ya que la mayoría de las enzimas son muy sensibles a los cambios de ph. Desviaciones de pocas décimas por encima o por debajo del oh óptimo pueden afectar drásticamente su actividad. Latemperatura también influye ya los aumentos de temperatura aceleran las reacciones químicas, las enzimas por lo general siguen esta regla sin embargo al ser proteínas, a partir de cierta temperatura se...