Actividad Enzimatica

Introducción

Las enzimas son biomoléculas de naturaleza proteica que actúan en pequeñas cantidades, como catalizadores de muchas de las reacciones químicas que produce el organismo (1), debido a que disminuyen la energía de activación, consiguiendo así acelerar el proceso millones de veces . Una reacción que se produce bajo el control de una enzima alcanza el equilibrio mucho más deprisaque la reacción no catalizada y en estas reacciones las enzimas no son consumidas, ni alteran el equilibrio químico.

En su estructura globular, se entrelazan y se pliegan una o más cadenas polipeptídicas, que aportan un pequeño grupo de aminoácidos para formar el sitio activo, o lugar donde se adhiere el sustrato de forma especifica, y donde se realiza la reacción, convirtiendo el sustrato enmoléculas diferentes denominadas productos.

Debido a su naturaleza proteica, la actividad de las enzimas puede verse alterada por diversos factores, entre los que cabe destacar pH y temperatura (2) , los que disminuyen o impiden la actividad de las enzimas, debido a que las desnaturalizan ( por pérdida de su estructura), igualmente la actividad es afectada por la concentración de lapropia enzima y del sustrato y otros factores físico-químicos.

Dicho lo anterior, el siguiente práctico tiene como objetivo determinar la cantidad mínima de enzima para hidrolizar almidón y el efecto de la temperatura y el pH en la reacción enzimática.

Hidrólisis de almidón: en este procedimiento se libera glucosa,
Esta es la base para los experimentos en los que se detecta presencia dealmidón o glucosa. (3)

Efecto de la temperatura: La elevación de la temperatura incrementa la velocidad de una reacción catalizada por enzimas. Al principio la velocidad de reacción aumenta cuando la temperatura se eleva debido al incremento de la energía cinética de la energía de las moléculas reactantes. (4)

Efecto del pH: El pH óptimo de una enzima puede guardar relación con cierta cargaeléctrica de la superficie, o con condiciones óptimas para la fijación de la enzima a su sustrato. Cuando hay un exceso de iones hidrogeno, las enzimas los unen a sus moléculas y ante un déficit los ceden. (5)



Hipótesis: Determinar en la experiencia práctica la hidrólisis enzimática del almidón y comprobar los efectos que genera la temperatura y pH en la reacción enzimática.

Objetivosgenerales:

▪ Comprender los conceptos de actividad enzimática.

▪ Conocer procedimientos para determinar la actividad de una enzima en muestras biológicas.
▪ Estudiar el efecto que tiene en la actividad de una enzima las variaciones de pH y temperatura.


Metodología

Materiales:

▪ 13 tubos de ensayo.

▪ 1 gradilla.

▪ Baño de agua a 50°C.▪ 1 vaso precipitado de 100 ml.

▪ Propipeta.

▪ 1 pipeta de 1 ml.

▪ 3 pipetas de 2 ml.

▪ Embudo.

Reactivos:

▪ Lugol.

▪ Solución suero fisiológico.

▪ Yodo.

▪ Almidón 1% p/v.

▪ Tampones fosfato a pH 7,0; 4,0 y 10,0.



Procedimiento Experimental

PARTE A: Reacciónenzimática. Cantidad mínima de enzima.

Se eligió a un integrante de nuestro grupo el cual no había comido antes del laboratorio, éste se enjuago la boca con agua de la llave, luego de esto volvió a enjuagarse la boca pero, esta vez con 30 mL de suero fisiológico, este proceso duró 40 segundos y se agregó al vaso precipitado. Este contenido se agregó a cuatro tubos específicos, además de otrosreactivos, los cuales se especifican a continuación:

|Tubos |1 |2 |3 |4 |5 |
|Almidón |3,0 |3,0 |3,0 |3,0 |3,0 |
|Suero fisiológico |2,0 |1,5 |1,0...