actividad ezimatica

1. OBJETIVOS
1.1 Demostrar el efecto o influencia del pH sobre la velocidad de reacción de la amilasa.
1.2 Demostrar el efecto o influencia de la temperatura sobre la velocidad de reacción de la amilasa.

2. INTRODUCCION
Las enzimas, en general, al actuar como biocatalizadores, aceleran reacciones químicas específicas, experimentando cambios físicos durante ellas, pero recuperando suestado original cuando la reacción química ha terminado. Sin embargo dada la naturaleza proteica de la molécula enzimática, diferentes factores físicos y químicos pueden modificar la actividad de una enzima, siendo lo más importante la temperatura y el pH. Las enzimas transforman rápidamente los sustratos a temperaturas y a valores de pH óptimos característicos para cada una respectivamente.
Respectoal pH, las enzimas requieren, para actuar con máxima eficiencia, una determinada concentración de iones hidrogeno en el medio, por tanto, cada enzima tiene un pH óptimo de acción. El efecto del pH se explica por la acción de la concentración de protones en la disociación de distintos grupos del sustrato y en especial de la enzima, que participan tanto en la unión enzima-sustrato y en el mecanismocatalítico mismo, como en el mantenimiento de la determinada conformación de la enzima. A valores de pH por encima o por debajo del pH optimo, disminuye la actividad enzimática por lo que, generalmente se describe una curva en forma de campana.
Respecto a la temperatura, al igual que el pH, existe un rango, algunas veces muy pequeño, donde es máxima la actividad enzimática, que está determinadopor la magnitud de las variaciones de la velocidad inicial en función de la temperatura del medio, lo que significa que la velocidad inicial de reacción aumentará con la temperatura hasta que se haga prácticamente imposible de medir debido a una activación. La mayoría de las enzimas son completamente inactivadas por encima de los 70 °C.
La temperatura óptima de reacción enzimática es el resultadode un balance entre el incremento en la actividad y la velocidad de destrucción de la enzima. La temperatura óptima no es un valor constante para una enzima dada, sino que depende del tiempo durante el cual se hace la medición de la actividad. Mientras más corto sea el tiempo de medición, más alta será la temperatura óptima.
Las moléculas deben poseer cierta energía de activación para que puedanreaccionar y las enzimas actúan disminuyendo la energía de activación, permitiendo que la reacción avance rápidamente. Se puede determinar fácilmente el efecto de la temperatura, exponiendo la enzima a diferentes temperaturas y se mide la cantidad de actividad residual.
Para estudiar el efecto de estos factores sobre una reacción enzimática, se debe trabajar en condiciones de operación biendeterminadas. Los otros paramentos o factores, deben permanecer constante respecto al factor determinante. Para ello se trabajará como sustrato almidón y se determinara las variaciones del almidón según procedimiento de identificación y cuantificación de sustrato residual, utilizando solución iodada.

3. MATERIAL METODOS
3.1 Material Biológico :
Amilasa

3.2 Materiales:
Pipetas
Tubos deensayos
Baño maría
Cocina eléctrica
Balanza

3.3 reactivos
Solución buffer acetato.
Solución buffer fosfato.
Solución buffer carbonato.
Solución de almidón al 1%.
Solución de enzima al 1%.
Solución NaCl 0.1M
HCl 0.05 M
Solución Iodada
Sol. Cúprico alcalino

4. PROCEDIMIENTO:

4.1. OBTENCION DE ENZIMA AMILASA
En un matraz colocar saliva aproximadamente 20 -30 mL
Mezclar a la mismaproporción con buffer fosfato
Con una gasa o algodón proceder a filtrar la mezcla
El filtrado corresponde a la enzima
4.2. EFECTO DEL pH SOBRE LA VELOCIDAD DE REACCION DE LA AMILASA SALIVAL.
A. Sistema de Incubación:
COMPONENTES Y PROCESO
SISTEMA (Tubos)

1
2
3
Soluc. Almidón 1%
1.0
1.0
1.0
Buffer pH 2.5
3.0
-
-
Buffer pH 6.8
-
3.0
-
Buffer pH 9.0
-
-
3.0
Soluc. de...