Actividad fibrinoliticas de venenos

3.2. Material de Laboratorio

3.2.1 Sustratos
Fibrinógeno Bovino. (Sigma Chemical Company).

b. Actividad Coagulante

Se seguió el método descrito por Copley (1973), usando plasma humanocitratado o fibrinógeno bovino, este último a una concentración de 5mg/ml en buffer Tris HCl 0,05 M pH 7,4. 0,2 ml del sustrato de preincubaron por 10 minutos a 37 ºC para luego agregar 0,1 ml del venenocrudo. Se determinó la actividad enzimática dividiendo la inversa del tiempo de coagulación (UA) entre los mg de proteína utilizados. Así mismo se calculó la dosis coagulante mínima (DCM) la cualestá definida como la cantidad de muestra (µg) que produce un coágulo en 60 segundos. Se definió la dosis coagulante mínima sobre plasma y sobre fibrinógeno como DCM-P y DCM-F, respectivamente.Resultados

Los valores de DCM-F y actividad coagulante sobre fibrinógeno expresados en actividad enzimática también fueron variables y en general se corresponden con los valores de actividad coagulantesobre plasma. El efecto coagulante sobre fibrinógeno fue mayor en las muestras de Amazonas y UY-3 presentando valores de DCM-F y de actividad enzimática de 1,08, 1,47, 1,41 y 1,25 µg y de 15,43, 11,35,11,83 y 13,28 UA/mg para las muestras AM-1, AM-2, AM-3 y UY-3, respectivamente. El valor más bajo, al igual que en la actividad coagulante sobre plasma, fue para la muestra JN-2 presentando un DCM-F de30,01 µg y un valor de actividad enzimática de 0,56 UA/mg (ver Tabla 5). Estos datos no fueron sometidos al análisis estadístico, sin embargo se podría esperar de este un resultado similar al halladoen la actividad coagulante sobre plasma, esto queda evidenciado en la similaridad de la distribución de los datos de actividad coagulante sobre plasma que con los de fibrinógeno vistos desde ungráfico de barras (Figura 9).


Tabla 5. Actividad coagulante sobre fibrinógeno de los venenos de B. atrox de tres regiones del Perú.
Muestra
DCM-F (µg)

Actividad Enzimática (UA/mg)
AM-1
1,08...