Actividad Nitrogenasa
Páginas: 3 (524 palabras)
Publicado: 27 de febrero de 2013
Preparación del acetileno
El acetileno se genera a partir de carburo cálcico, añadiéndole agua destilada en un recipiente diseñado al efecto del que se pueden tomar alícuotas del gas con unajeringuilla.
Determinación de la actividad Nitrogenásica
Se toman, por duplicado, raíces noduladas en viales con un volumen total de 40 ml. Se cierran herméticamente con tapones de goma. Acontinuación se reemplazan 4 ml (10% v/v del volumen total del vial) de la atmósfera interna de los viales por 4 ml de acetileno preparado a partir de carburo cálcico. Se incuban los viales durante 30 minutos(durante los cuales se consigue una respuesta lineal). Terminada la incubación, se toman muestras de 0.5 ml de gas de cada vial por triplicado. La cantidad de etileno producida se determina porcromatografía de gases empleando un cromatógrafo Shimadzu GC-8A con detector de ionización de llama acoplado a un integrador Spectraphysic SP4290 con las siguientes condiciones:
TºCinyector/detector 150ºC
TºC columna 50ºC
Presión gas portador 1.2 kg/cm2
ColumnaPorapak N 80/100 int 1/8’’55
Además, se prepara una jeringuilla con una cantidad conocida de etileno (10 nmol), que llamaremos muestra patrón. El cromatógrafo detecta unaserie de gases que serán registrados en forma de picos, con un tiempo de retención constante (el pico del etileno aparece a un tiempo de aproximadamente 0.60 minutos) y una altura determinada quevendrá medida en cuentas (en nuestro cromatógrafo, el pico del patrón es de 15000 cuentas, por lo que no es preciso prepararlo).
Para los cálculos se aplica el siguiente razonamiento, resumidofinalmente en la fórmula de abajo:
-Si 0.5 mL de patrón (10 nmol de etileno) miden 15000 cuentas, 0,5 mL de la muestra, que darán una altura CM, tendrán una contenido de etileno de 10 x...
El acetileno se genera a partir de carburo cálcico, añadiéndole agua destilada en un recipiente diseñado al efecto del que se pueden tomar alícuotas del gas con unajeringuilla.
Determinación de la actividad Nitrogenásica
Se toman, por duplicado, raíces noduladas en viales con un volumen total de 40 ml. Se cierran herméticamente con tapones de goma. Acontinuación se reemplazan 4 ml (10% v/v del volumen total del vial) de la atmósfera interna de los viales por 4 ml de acetileno preparado a partir de carburo cálcico. Se incuban los viales durante 30 minutos(durante los cuales se consigue una respuesta lineal). Terminada la incubación, se toman muestras de 0.5 ml de gas de cada vial por triplicado. La cantidad de etileno producida se determina porcromatografía de gases empleando un cromatógrafo Shimadzu GC-8A con detector de ionización de llama acoplado a un integrador Spectraphysic SP4290 con las siguientes condiciones:
TºCinyector/detector 150ºC
TºC columna 50ºC
Presión gas portador 1.2 kg/cm2
ColumnaPorapak N 80/100 int 1/8’’55
Además, se prepara una jeringuilla con una cantidad conocida de etileno (10 nmol), que llamaremos muestra patrón. El cromatógrafo detecta unaserie de gases que serán registrados en forma de picos, con un tiempo de retención constante (el pico del etileno aparece a un tiempo de aproximadamente 0.60 minutos) y una altura determinada quevendrá medida en cuentas (en nuestro cromatógrafo, el pico del patrón es de 15000 cuentas, por lo que no es preciso prepararlo).
Para los cálculos se aplica el siguiente razonamiento, resumidofinalmente en la fórmula de abajo:
-Si 0.5 mL de patrón (10 nmol de etileno) miden 15000 cuentas, 0,5 mL de la muestra, que darán una altura CM, tendrán una contenido de etileno de 10 x...
Leer documento completo
Regístrate para leer el documento completo.