actividad

“Laboratorio N°1: Crecimiento microbiano de E. Coli BL21”

Alumnos: Daniela Castillo
Jairo Pereira
FECHA: Viernes 29 de Agosto

Descripción del proyectoEscherichia coli es una bacteria habitual en el tractogastrointestinal de los animales y de los humanos, la cual es muy utilizada en diversos tipos de análisis y experimentos debido a su gran facilidad de duplicación.
La Escherichia coli BL21 bajo inducción, permite la producción de la proteína recombinante cutinasa, para obtener un buen crecimiento se controlaran los parámetros de temperatura, ph, oxigeno, sustrato limitante
Para todo desarrolloexperimental es fundamental la elaboración de un control, el cual contiene las condiciones óptimas de crecimiento para el microorganismo. Su función principal es determinar que las fallas existentes, no sean por malas condiciones del cultivo y que los nutrientes estén en óptimas condiciones (no estén vencidos, o contaminados).
El proyecto a realizar consta de varias etapas, en una primerainstancia se desarrollará un cultivo control con el objetivo de determinar que el trabajo realizado no posee errores por la composición o fecha de elaboración de los productos involucrados.
En una segunda instancia, se determinara el crecimiento de la cepa de e coli, que se dejará creciendo la noche anterior para poseer una muestra fresca y en óptimas condicione para hacer el seguimiento de uncrecimiento exponencial.
Finalmente se realizara una serie de análisis como determinación de azucares mediante método de DNS, para poder determinar todos los parámetros cinéticos experimentales, de acuerdo a los datos recopilados en la curva de crecimiento exponencial.
Objetivos Técnicos2.1 Objetivo GeneralCorresponden a los pasos o etapas necesarios para cumplir con el objetivo general. Cada objetivoespecífico debe reportar un resultado claro, cuantificable, repetible y verificable.
Objetivos Específicos• Comparar cinéticas de crecimiento de e coli BL21 en diferentes condiciones ambientales.
• Obtener curva de crecimientos comparables con las descritas en la literatura.
• Obtener un rendimiento de 1,5 g/L de masa celular al final de la fermentación.
• Generar un análisis de resultados.MétodosMetodología ExperimentalPara lograr una biomasa de 1,5g/l de la cepa bacteriana E.coli. es necesario realizar una fermentación tipo BATCH en un fermentador, para lo cual se estima realizarla en 3 días avilés.
Día 1 (jueves 4 de sep):
Preparación del medio de cultivo y esterilización del reactor: El medio de cultivo y el vaso del fermentador serán esterilizados juntos en una autoclave,para evitar traspasos y contaminaciones.
Inspección del software: Se realizaran pruebas previas para conocer y establecer los programas del controlador para no tener problemas durante la fermentación.
Activación del inoculo: junto con la esterilización del reactor se dejara un matraz de 250ml con 100ml de medio de cultivo y tapón de gasa, el cual será inoculado con la cepa apenas se enfrié,dicho matraz estará toda la noche con 200rpm de agitación a 37°C para tener un cultivo activo y listo para su escalamiento.
Dia 2 (Viernes 5 de sep):
Inoculación del fermentador: una vez revisado que no hayan contaminación en nuestro medio de cultivo se procede a inocular con 100ml desde un medio fresco de E. coli
Seguimiento de la fermentación: cada media hora se tomaran 5ml de muestra, loscuales servirán para medir peso seco de la biomasa, azucares reductores y la turbidez del cultivo.
Termino de la fermentación: el término de la fermentación se llevara a cabo cuando la turbidez del medio se mantenga constante y la concentración de azucares reductores hayan descendido lo suficiente para considerarla nula o sin efecto
Dia 3 (sábado 6 de sept):
Limpieza del fermentador: El...