Actividades

LABORATORIO DE GENÉTICA

PRACTICA 1: MANEJO Y ESTUDIO DE Drosophila

OBJETIVO Familiarizarse con el manejo y principales características fenotípicas de Drosophila melanogaster, haciendo especial hincapié en la discriminación del sexo y en los distintos mutantes que serán utilizados a lo largo de las prácticas. INTRODUCCION: Uso de Drosophila: Hay muchas razones que hacen de D. melanogaster(Figura 1) un organismo idóneo para la experimentación: -Es muy abundante y de fácil captura. -Se cultiva fácilmente en el laboratorio. -Produce gran cantidad de descendientes (adecuado para comprobar las proporciones mendelianas). -A 25°C se completa el ciclo biológico en 10-11 días. -Solamente posee 4 pares de cromosomas. -Tiene cromosomas gigantes en las glándulas salivares y otros tejidos de lalarva, lo que facilita su observación microscópica. -Se trabaja con ella desde 1905 y por lo tanto se dispone de una abundante bibliografía. -Hay una gran cantidad de mutantes, tanto naturales como inducidos, y muchas cepas especiales que permiten cuidadosos análisis genéticos.

Figura 1.- Macho y hembra adultos de D. melanogaster.

Medios de cultivo Las moscas en estado salvaje se alimentande levaduras que fermentan los jugos de las plantas. Para la captura de individuos en la naturaleza se puede preparar una papilla con plátano machacado, harina y levadura de pan. En el laboratorio Drosophila puede cultivarse en botellas estériles con una comida preparada a base de harina de maíz, azúcar, levadura y agar como espesante. Para evitar contaminaciones se añade un fungicida,normalmente Nipagín (metil p-oxibenzoato), y un bactericida (ácido propiónico). Una vez solidificada se le añade levadura picada (para proporcionar una fuente de proteínas a las larvas) y un papel en zigzag (para que absorba la humedad y como superficie para la pupación). Estos frascos se tapan con un algodón esterilizado y se indica la fecha y el tipo de cepa o cruce cultivado en la botella. La temperaturaóptima de cultivo es de 25°C. A esta temperatura el ciclo biológico se completa en 10-11 días. A temperaturas superiores se producen fenómenos de esterilidad y muerte, a temperaturas inferiores el desarrollo es muy lento. Observación de los individuos Para facilitar su estudio, conviene anestesiar las moscas, para ello en el laboratorio disponemos de dos métodos, eter y CO2. 1.-Eter Se toma elfrasco donde se encuentran los adultos y se golpea suavemente en un corcho para que caigan hacia el fondo. Se retira el algodón y se vuelca el frasco sobre el eterificador. El eterificador (una botella o tubo de vidrio) se tapa con un algodón impregnado de éter. Cuando las moscas están dormidas se vuelcan sobre un papel y se observan con la lupa. El tiempo que tardan las moscas en dormirse es muyvariable, y depende bastante de la edad (cuanto más viejas son, antes se duermen). 2.-CO2 El proceso en su inicio es similar salvo que el algodón con el que se tapa el fraso eterificador debe estar seco. A continuación se introduce una aguja perforada por la cual pasará el CO2 y de esta manera, debido a la escasez de oxigeno, las moscas quedan

anestesiadas. Se vacia el contenido del frascoeterificador sobre la placa difusora del CO2 sobre la que se realizará la observación. En este caso las moscas no mueren por exceso de anestesia, pero hay que tener cuidado por que se despertarán en el momento que cese el suministro de CO2. Consejos prácticos: 1.- Hay que tener cuidado, pues una exposición prolongada al éter les puede producir la muerte (se reconoce porque las alas se disponenperpendicularmente al cuerpo). 2.- Hay que cuidar no mantener abierta la botella del cultivo, para evitar que las moscas se escapen o que entren otras y el cultivo se contamine. 3.- No dejar abierto el eterificador ni la botella de éter, ya que además de evaporarse, por su bajo punto de ebullición y cargar el ambiente, hay peligro de explosión, ya que es altamente inflamable. Por lo tanto, no se puede...