Acuaporinas, paper traducido

Acuaporinas
Abstracto
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Antecedentes: Aquaporin-1 canales (AQP1) son canales de agua constitutivamente activos que
permiten un rápido flujo de agua osmótico transmembrana, y también sirven como canales de
iones GMP cíclico-bloqueados. Cloruro de tetraetilamonio (TEA; 0,05 a 10 mM) fue demostrado
previamente para inhibir lapermeabilidad al agua osmótica de canales AQP1 humanos expresados
en oocitos de Xenopus. El objetivo del presente estudio fue determinar si flujo osmótico de agua
en canales AQP1 eran bloqueados por TEA en los riñones, y recombinantes AQP1 canales
expresadas en un riñón línea celular derivada MDCK. También demuestran que el TEA no inhibe la
conducción iónica dependiente de GMPc de AQP1 expresado enovocitos, apoyando la idea de que
los flujos de agua y de iones implican vías farmacológicamente distintos en el complejo de AQP1
tetramérica.
Resultados: TEA Bloquea la permeabilidad al agua de canales AQP1 en células de riñón y derivada
de riñón, lo que demuestra este efecto no se limita al sistema de expresión de ovocitos. Inhibición
equivalente es vista en las células MDCK con expresión AQP1mediada por virus, y en las
extremidades renales delgadas de bucles de Henle de rata, que expresan abundantemente nativa
AQP1, pero no en orden ascendente extremidades delgadas que no expresan AQP1. TEA externa
(10 mM) no bloquea la GMPc dependiente de AQP1 conductancia iónica, medida por dos
electrodos de fijación de voltaje después de la pre-incubación de los ovocitos en 8BrcGMP (10-50
mM)o durante la aplicación del donante de óxido nítrico, nitroprusiato de sodio (2-4 mM).
Conclusiones: TEA inhibe selectivamente la permeabilidad al agua osmótica a través de canales
AQP nativas y expresado heteróloga. Las vías para el agua y los iones en AQP1 difieren en la
sensibilidad farmacológica a TEA, y son consistentes con la idea de vías independientes de soluto
dentro de la estructuradel canal. Los resultados confirman la utilidad de TEA como una
herramienta farmacológica para el análisis de función AQP1.
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Antecedentes
Tetraetilamonio es conocido como un bloqueador de poro-oclusión de los canales de
potasio dependientes de voltaje [1], pero también bloquea otros canales catiónicos talescomo calcio dependiente de canales de K + [2,3] y el receptor de acetilcolina nicotínico [4].
TEA en 0,1 a 10 mM también inhibe el flujo de agua a través de canales AQP1 humanos
expresados en oocitos de Xenopus, la disminución de la tasa de hinchazón neta en
solución salina hipotónica en un 30-40% en comparación con los ovocitos que expresan
AQP1-no tratados con TEA [5]. Este efecto de bloqueosobre el flujo de agua osmótico se
demostró la participación AQP1 canales específicamente mediante el uso de mutagénesis

dirigida al sitio (tirosina 186 a fenilalanina) para generar un canal de Y186F AQP1 que es
insensible a bloquear por TEA, pero conserva la sensibilidad para bloquear por el
mercurio. El efecto de bloqueo de mercurio en AQP1 canales depende de un residuo
vecino, cisteína189 [6]. TEA ofrece ventajas atractivas sobre el mercurio como un
bloqueador reversible y menos tóxico para AQP1 canales en los análisis experimentales de
la función del canal de agua, sin embargo, la relevancia de TEA como bloqueador de
canales AQP1 fuera del sistema de expresión de Xenopus no se ha examinado
anteriormente.
Las diferencias en las propiedades (incluyendo las sensibilidadesfarmacológicas) se han
observado para los canales iónicos expresados en oocitos en comparación con aquellos en
los tejidos nativos. Por ejemplo, el receptor de acetilcolina Torpedo y el Shaker K proteína
de canal + se diferencian en las fracciones de proteína glicosilada, la composición de las
cadenas de oligosacáridos, y el grado de maduración de la proteína cuando se expresa en
oocitos de...