AD1026801

Universidad Complutense de Madrid
Facultad de Farmacia
Departamento de Microbiología II

Mapa génico del plásmído de virulencia de
Salmonella enteritidis y caracterización de
regiones homólogas del cromosoma de
Salmonella typhi

Memoria presentada para optar al
Grado de Doctor en Farmacia
por José Manuel Rodríguez Peña
Dirigida por el Dr. Rafael Rotger Anglada

Madrid, 1996

D. CÉSAR NOMBELACANO, CATEDRÁTICO-DIRECTOR DEL
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGÍA DE LA FACULTAD DE FARMACIA
DE LA UNIVERSIDAD COMPLUTENSE DE MADRID

CERTIFICA:

Que D. José Manuel Rodríguez Peña ha realizado en el
Departamento de Microbiología II de la Facultad de Farmacia de
la Universidad Complutense de Madrid, bajo la dirección del
Dr. O. Rafael Rotger Anglada, el trabajo que presenta para optar
al grado de doctor enFarmacia, con el titulo:
Mapa génico del plásmido de virulencia de Salmunella enterltid¡s
y caracterización de reglones homólogas del cromosoma de
Salmonella typhi.

Y para que conste, firmo la presente
certificación en Madrid, a 14 de Marzo de 1996.

Edo. Dr. D. César Nombela Cano.

La realización de este trabajo ha sido posible gracias
a la concesión de una Seca del Ministerio de Educación
yCiencia para la formación de personal investigador.

A mi familia.

Quiero expresar mi agradecimiento a todas aquellas personas que de una forma u otra
han colaborado en la realización de este trabajo:

Al Dr. César Nombela Cano, por permitirme la realización del mismo en el Departamento
de Microbiología II de la Facultad de Farmacia de la Universidad Complutense de Madrid.

Al director de estatesis, Dr. Rafael Rotger Anglada, por la constante ayuda e interés
mostrado tanto en su periodo de realización como de escritura.

A Miguel, compañero de fatigas investigadoras, sin cuya colaboración este trabajo no
hubiera sido posible.
A María Yuste, por su amistad y permanente apoyo.
A isabel, Mada, Alejandra, Cristina, Antonia y Alberto por su amistad y colaboración en
todo momento.
A Amaliapor su amabilidad y colaboración inestimable.
A Mauibel, por el excelente trabajo realizado en la secuenciación del DNA.
A Conchita Pintado, Javier Arroyo, Javier Regidor, Humberto, Fede, Victor, Lucía, M.
Luisa, Benito, José Alberto, Rosi y en general a todos los compañeros del Departamento, por
su ayuda desinteresada.

INDICE

Indice- 1

Abreviaturas

4

Introducción

6

1.1.- Plásmidos devirulencia de Salmonella

7

1.2.- Genes descritos en los plásmidos de virulencia de Salmonella

9

1.2.1.- Genes implicados en virulencia
1.2.1.1.- Operón spv
1.2.1.2.- Genes y regiones implicados en la resistencia al suero
1.2.1.3.- vagckago
1.2.2.- Otras regiones plasmídicas no implicadas en virulencia

9
9
12
15
15

1.2.2.1.- 1S630
1.2.2.2.- tipA
1.2.2.3.- Región de genes de transferencia (tra)1.2.2.4.- Genes relacionados con la estabilidad y replicación plasmidica
1.2.2.5.- Operón samAB
1.2.2.6.- Región implicada en síntesis de fimbrias (peO

15
16
17
22
24
26

1.3.- Familia Dsb de proteínas con actividad óxido-reductasa de puentes
disulfuro en periplasma de bacterias

29

Objetivos

35

Materiales y Métodos

37

2.1.- Materiales

38

2.1.1.- Medios de cultivo

38

2.1.2.- Marcadores depesos moleculares de DNA

39

2.1.3.- Plásmidos

39

2.1.4.- Cepas

41

2.1.5.- Nomenclatura

41

2.1.6.- Soporte informático

41

2.2. Métodos

42

2.2.1.- Preparación de DNA genámico de bacterias

42

2.2.2.- Extracción de DNA plasmídico de Salmonella

42

2.2.3.- Extracción de DNA plasmídico de Escherich¡a cali

43

2.2.4.- Extracción rápida de DNA plasmídico de E. cali: método bo¡ling

442.2.5.- Electroforesis en geles de agarosa

44

2.2.6.- Extracción de DNA a partir de geles de agarosa

44

-

Indice- 2

2.2.7.- Determinación de tamaño, pureza y concentración de DNA
2.2.8.- Tratamientos enzimáticos del DNA
2.29.- Transformación de E. cali

44
45
46

2.2.10.2.2.11.2.2.12.2.2.13.-

47
50
50
51

Hibridación DNA-DNA
Hibridación a partir de colonias (Colony blol)
Secuenciación...