Adenovirus

Detección de Adenovirus infecciosas en cultivo celular del mRNA por PCR con transcripción inversa
Gwangpyo Ko, 1 * Theresa L. Cromeans, 1,2 y Mark D. Sobsey 1
La Universidad de Carolina del Norte en Chapel Hill, Chapel Hill, Carolina del Norte, 1 de Centros para el Control y Prevención de Enfermedades, Atlanta, Georgia2

Abstracto
Hemos desarrollado y evaluado la transcripción inversa(RT)-PCR en la detección del ARNm de ensayo para el cultivo de células infecciosas adenovirus (anuncios) mediante anuncios tipo 2 (AD2) y Ad41 como modelos. Sólo se detectan anuncios infecciosas porque son los únicos capaces de producir ARNm durante su replicación en cultivo celular. Tres cebadores para RT-PCR de amplificación de ARNm fueron evaluadas por su sensibilidad y especificidad: una regiónconservada de los retrasos en la transcripción del mRNA que codifica una proteína hexon virión estructural y la detección de una amplia gama de anuncios y dos cebadores dirigidos a una región de una pronta ARNm transcripción que específicamente detecta ya sea AD2 y AD5 o Ad40 y Ad41. MRNAs de infectados por el A549 y Graham 293 células fueron recuperados de células lisados con oligo (dT) endiferentes períodos de tiempo después de la infección y el tratamiento con RNasa libre de DNasa para eliminar la contaminación residual de ADN, y luego del anuncio del mRNA fue detectado por RT-PCR. El ARNm de ad2 se detectó ya en 6 horas después de la infección en 106 unidades infecciosas (UI) por cultivo celular y después de largo tiempo de incubación en niveles tan bajos como de 1 a 2 UI por cultivocelular. El ARNm de Ad41 se ha detectado tan pronto como 24 horas después de la infección en 106 UI por cultivo celular y en niveles tan bajos como 5 UI por cultivo celular después de los tiempos de incubación más largo. Para confirmar la detección de los virus sólo infecciosas, se demostró que no se detectó ARNm de AD2 y Ad41 inactivada por cloro libre o altas dosis de colimará, monocromática (254nm) la radiación UV. Detección de ARNm ad2 coincidió exactamente con la presencia de la infectividad del virus detectado por cytopathogenic efectos en cultivos de células, pero la detección de ARNm producido antes. Estos resultados sugieren que la detección de mRNA por RT-PCR en cultivos celulares inoculados es muy sensible, específico y rápido método para detectar infecciosas anuncios en materiade agua y otras muestras ambientales.


Hemos desarrollado y evaluado la transcripción inversa (RT)-PCR en la detección del ARNm de ensayo para el cultivo de células infecciosas adenovirus (anuncios) mediante anuncios tipo 2 (AD2) y Ad41 como modelos. Sólo se detectan anuncios infecciosas porque son los únicos capaces de producir ARNm durante su replicación en cultivocelular. Tres cebadores para RT-PCR de amplificación de ARNm fueron evaluadas por su sensibilidad y especificidad: una región conservada de los retrasos en la transcripción del mRNA que codifica una proteína hexon virión estructural y la detección de una amplia gama de anuncios y dos cebadores dirigidos a una región de una pronta ARNm transcripción que específicamente detecta ya sea AD2 y AD5 o Ad40 yAd41. MRNAs de infectados por el A549 y Graham 293 células fueron recuperados de células lisados con oligo (dT) en diferentes períodos de tiempo después de la infección y el tratamiento con RNasa libre de DNasa para eliminar la contaminación residual de ADN, y luego del anuncio del mRNA fue detectado por RT-PCR. El ARNm de ad2 se detectó ya en 6 horas después de la infección en 106 unidadesinfecciosas (UI) por cultivo celular y después de largo tiempo de incubación en niveles tan bajos como de 1 a 2 UI por cultivo celular. El ARNm de Ad41 se ha detectado tan pronto como 24 horas después de la infección en 106 UI por cultivo celular y en niveles tan bajos como 5 UI por cultivo celular después de los tiempos de incubación más largo. Para confirmar la detección de los virus sólo infecciosas,...