Adn informe
Páginas: 9 (2101 palabras)
Publicado: 22 de noviembre de 2011
INTRODUCCIÓN
El aislamiento del ADN es un procedimiento de rutina para recoger ADN para su posterior análisis molecular o forense. Hay tres pasos básicos y un paso opcional en la extracción de ADN:
* Ruptura las celdas abiertas, comúnmente conocida como la ruptura celular o lisis celular, para exponer el ADN en su interior. Esto comúnmente se logra mediante el pulido o sonicación de lamuestra.
* Extracción de lípidos de la membrana mediante la adición de un detergente.
* Extracción de proteínas mediante la adición de una proteasa (opcional, pero casi siempre se usa).
* Precipitar el ADN con un alcohol, por lo general etanol helado o isopropanol. Dado que el ADN es insoluble en estos alcoholes, será agregada juntos, dando una como resultado un sedimento en lacentrifugación. Este paso también elimina la sal soluble en alcohol.
Los refinamientos de la técnica incluyen la adición de un agente quelante para secuestrar cationes divalentes como el Mg2 + y Ca2 +, que impide que las enzimas como la ADNasa degraden el ADN.
Proteínas celulares y las histonas unidas al ADN se puede eliminar mediante la adición de una proteasa o precipitando las proteínas conacetato de sodio o amonio, o extrayéndolas con una mezcla de fenol-cloroformo antes de la precipitación del ADN.
Si se desea, el ADN puede ser resolubilizado en un amortiguador ligeramente alcalino o en agua ultra pura.
El presente informe presenta una actividad de extracción de DNA desarrollada en los laboratorios de química del IME, el día 1 de marzo de 2011 con la finalidad de entender elproceso de aislamiento del DNA y con la satisfacción de que dicha experiencia será de mucha utilidad en muchas aplicaciones de la medicina
Ya que la genética será la medicina del futuro, y el estudio de la misma se comienza estudiando el genoma es importante que conozcamos métodos que nos permitan separarlo para poderlo analizar, en este caso el método empleado en esta experiencia fue el métodode salting out, adaptado y modificado de Miller y colaboradores.
Es objetivo de este informe:
* Obtener muestra de sangre por venopunción y así poder aislar DNA.
* Hacer uso de otras muestras biológicas para aislar el DNA: Muestra de E. Coli.
* Hacer el aislamiento de DNA a través de la utilización del método salting out (en caso de aislamiento en sangre)
* Conocer ydeterminar amortiguadores y reactivos que ayudarán a la realización del aislamiento: lisis A, Tris-HCL, isopropanol, etanol, SDS, EDTA.
* Obtener DNA con un máximo grado de pureza, basado en la buena aplicación del método.
MÉTODO EMPLEADO:
Método Salting Out: técnica de extracción de proteínas, en este método se utiliza un buffer que contiene Proteinasa K (Tris-HCl). A altas fuerzas iónicas, lasolubilidad de las proteínas disminuye, este fenómeno es conocido como salting out. Este fenómeno se da básicamente por la competencia por las moléculas de agua que forman parte de la capa de solvatación
REACTIVOS EMPLEADOS:
* Isopropanol: (CH3 CHOHCH3). Líquido transparente, volátil e incoloro empleado en el laboratorio químico para extraer y disolver lípidos y en histología se usa comosolubilizante de los colorantes de grasas y como agente deshidratante. El isopropanol precipita el DNA porque compite con este por el agua, deshidratándolo y llevándolo al fondo del tubo.
* Etanol: (CH3CH2OH). Líquido volátil, incoloro, miscible con agua, metanol, éter, acetona y cloroformo. Se emplea principalmente como solvente en muchos procedimientos de laboratorio, como agentedeshidratante en histología como solvente de algunas sustancias y tinturas) y como desinfectante.
El papel que desempeña el Etanol en la extracción del DNA es que forma una capa arriba de la solución acuosa del DNA, el cual, se enrolla conforme sale de la solución y también se utiliza para precipitar la solución del ADN.
* Lisis A: se utiliza para ocasionar la rotura de la membrana...
El aislamiento del ADN es un procedimiento de rutina para recoger ADN para su posterior análisis molecular o forense. Hay tres pasos básicos y un paso opcional en la extracción de ADN:
* Ruptura las celdas abiertas, comúnmente conocida como la ruptura celular o lisis celular, para exponer el ADN en su interior. Esto comúnmente se logra mediante el pulido o sonicación de lamuestra.
* Extracción de lípidos de la membrana mediante la adición de un detergente.
* Extracción de proteínas mediante la adición de una proteasa (opcional, pero casi siempre se usa).
* Precipitar el ADN con un alcohol, por lo general etanol helado o isopropanol. Dado que el ADN es insoluble en estos alcoholes, será agregada juntos, dando una como resultado un sedimento en lacentrifugación. Este paso también elimina la sal soluble en alcohol.
Los refinamientos de la técnica incluyen la adición de un agente quelante para secuestrar cationes divalentes como el Mg2 + y Ca2 +, que impide que las enzimas como la ADNasa degraden el ADN.
Proteínas celulares y las histonas unidas al ADN se puede eliminar mediante la adición de una proteasa o precipitando las proteínas conacetato de sodio o amonio, o extrayéndolas con una mezcla de fenol-cloroformo antes de la precipitación del ADN.
Si se desea, el ADN puede ser resolubilizado en un amortiguador ligeramente alcalino o en agua ultra pura.
El presente informe presenta una actividad de extracción de DNA desarrollada en los laboratorios de química del IME, el día 1 de marzo de 2011 con la finalidad de entender elproceso de aislamiento del DNA y con la satisfacción de que dicha experiencia será de mucha utilidad en muchas aplicaciones de la medicina
Ya que la genética será la medicina del futuro, y el estudio de la misma se comienza estudiando el genoma es importante que conozcamos métodos que nos permitan separarlo para poderlo analizar, en este caso el método empleado en esta experiencia fue el métodode salting out, adaptado y modificado de Miller y colaboradores.
Es objetivo de este informe:
* Obtener muestra de sangre por venopunción y así poder aislar DNA.
* Hacer uso de otras muestras biológicas para aislar el DNA: Muestra de E. Coli.
* Hacer el aislamiento de DNA a través de la utilización del método salting out (en caso de aislamiento en sangre)
* Conocer ydeterminar amortiguadores y reactivos que ayudarán a la realización del aislamiento: lisis A, Tris-HCL, isopropanol, etanol, SDS, EDTA.
* Obtener DNA con un máximo grado de pureza, basado en la buena aplicación del método.
MÉTODO EMPLEADO:
Método Salting Out: técnica de extracción de proteínas, en este método se utiliza un buffer que contiene Proteinasa K (Tris-HCl). A altas fuerzas iónicas, lasolubilidad de las proteínas disminuye, este fenómeno es conocido como salting out. Este fenómeno se da básicamente por la competencia por las moléculas de agua que forman parte de la capa de solvatación
REACTIVOS EMPLEADOS:
* Isopropanol: (CH3 CHOHCH3). Líquido transparente, volátil e incoloro empleado en el laboratorio químico para extraer y disolver lípidos y en histología se usa comosolubilizante de los colorantes de grasas y como agente deshidratante. El isopropanol precipita el DNA porque compite con este por el agua, deshidratándolo y llevándolo al fondo del tubo.
* Etanol: (CH3CH2OH). Líquido volátil, incoloro, miscible con agua, metanol, éter, acetona y cloroformo. Se emplea principalmente como solvente en muchos procedimientos de laboratorio, como agentedeshidratante en histología como solvente de algunas sustancias y tinturas) y como desinfectante.
El papel que desempeña el Etanol en la extracción del DNA es que forma una capa arriba de la solución acuosa del DNA, el cual, se enrolla conforme sale de la solución y también se utiliza para precipitar la solución del ADN.
* Lisis A: se utiliza para ocasionar la rotura de la membrana...
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