ADN RECOMBINANTE

ANTICUERPOS MONOCLONALES DE SEGUNDA GENERACIÓN O ANTICUERPOS RECOMBINANTES
Como se mencionó, los AcMo de segunda generación o anticuerpos recombinantes (AcR) son moléculas producidas empleando técnicas de biología molecular y ADN recombinante. Dicho de otra manera, los AcR son generados a través de la inmortalización de los genes que codifican a la molécula de Ig, en lugar de inmortalizar lacélula productora del Ac como es el caso para los AcMo de primera generación.
La concepción, el diseño y la ingeniería de moléculas artificiales basadas en Ig se han facilitado enormemente gracias a dos características de estas proteínas. A nivel genético, los genes estructurales que codifican las Ig se prestan para hacer el trabajo de biología molecular. Estos genes se organizan en la forma deexones discretos, que corresponden a dominios completos en la proteína y que se encuentran separados por regiones intrónicas. Resulta así, por ejemplo, relativamente fácil manipular las secuencias intrónicas para añadir cambios que permitan la introducción en el gen de nuevas secuencias en lugares específicos seleccionados previamente, sin que ello implique riesgo alguno de alterar la secuenciacodificadora presente en los exones. De igual manera, a nivel proteico la organización estructural-funcional de las Ig en la forma de estos dominios en los que se encuentra almacenada la información necesaria para realizar una función específica, ha facilitado enormemente el logro de estos objetivos. Sin embargo, un elemento adicional que no se puede dejar de mencionar y que ha tenido un impactotremendo en el desarrollo de los AcR lo constituyen, los avances que han ocurrido en el campo de la biología molecular, especialmente en lo relacionado con el desarrollo de métodos para la creación de moléculas de ADN recombinante basados en la reacción en cadena de polimerasa (PCR).
De esta forma, es hoy posible clonar una pareja de regiones VH y VL responsables de una especificidad de interés yensamblarla en la forma de un anticuerpo funcional en el contexto de prácticamente cualquier clase o subclase de Ig humana.
En el ámbito de los organismos procariotas, es digno de mencionar como el conocimiento detallado que poseemos del genoma, arquitectura y ciclo de vida de bacteriófagos filamentosos y del fago lambda ha permitido la expresión eficiente de ADN codificante de anticuerpos en E. coli.Esto, a su vez, ha permitido el desplegamiento en estos fagos de repertorios gigantescos de Ac y con ello la posibilidad e imitar artificialmente la estrategia de selección empleada por el sistema inmune humoral. En la actualidad, esta tecnología de desplegamiento de Ac en fagos filamentosos ofrece una de las vías más poderosas para la creación de Ac humanos artificiales con inmunogenicidadreducida y para la creación de repertorios de Ac en la forma de genotecas combinatorias con una talla similar o igual a la de los repertorios naturales.
Los AcR constituyen entonces un conjunto bastante heterogéneo de proteínas artificiales en el que se pueden distinguir dos grandes grupos. El primero incluye moléculas completas de Ac, similares a las que se consiguen en forma natural, en las que estánpresentes los dos elementos estructurales que permiten la funcionalidad de la molécula, esto es las porciones Fab y Fc. Los Ac quiméricos y humanizados son ejemplos representativos de este grupo. El otro grupo está formado por un conjunto más heterogéneo de proteínas, basadas en la estructura de las Ig. Estas pueden encontrarse en la forma de entidades recombinantes autónomas (fragmentos tipoFab, Fv de cadena sencilla -scFv-, “diabodies”, “triabodies”, etc.), o como proteínas de fusión (moléculas en las que se combina la porción Fc o Fab con propiedades nuevas provistas por una toxina, una enzima, un receptor celular, una citoquina, etc.).

Anticuerpos quiméricos
Un anticuerpo quimérico es una molécula artificial en la que las porciones constantes de las cadenas pesada y liviana...