ADN recombinante

ESCUELA SUPERIOR PÓLITÉCNICA DE CHIMBORAZO
INGENIERÍA EN BIOTECNOLOGÍA AMBIENTAL
BIOTECNOLOGÍA AMBIENTAL
NOMBRE: Diana Carolina Gutiérrez Yépez 2117
SEMESTRE: 7mo “A”
FECHA: 20/03/2014
TÉCNICAS DE ADN RECONBINANTE
ADN recombinante (ADNr) es una forma de ADN artificial que se crea mediante la combinación de dos o más secuencias que normalmente no ocurren al mismo tiempo.
En cuanto ala modificación genética, se crea a través de la introducción de ADN pertinentes en un ADN existente de organismos, tales como los plásmidos de las bacterias, para codificar o alterar las características diferentes para un propósito específico, tales como resistencia a los antibióticos.
Se diferencia de la recombinación genética en los que no se produce a través de procesos naturales dentro dela célula, pero está diseñado.La técnica se llevó a cabo entonces por Lobban y Kaiser, Jackson, Symons y Berg y Stanley Norman Cohen, Chang, Herbert Boyer y Helling, en 1972-74.
La técnica consiste en introducir el gen seleccionado en el interior de un vector y éste, a su vez, dentro de una célula, denominada célula anfitriona. Aprovechando la maquinaria celular, el gen se expresa, sintetizándoseasí la proteína codificada en el gen. Además, al dividirse la célula, las nuevas células formadas contienen ese gen que también sintetizan esa proteína. Se genera un grupo celular que contiene un genoma distinto.
Las etapas en la producción de ADN recombinante son las siguientes:

1. Preparación de la secuencia del ADN para su clonación
Es la parte esencial del proceso, ya que el ADN debesepararse y concentrarse.
Partimos de células con núcleo, que deben ser lisadas (rotas).
Las proteínas estructurales, enzimas, ARN y restos moleculares deben separarse del ADN.
El ADN obtenido se concentra y se fragmenta por acción de las enzimas de restricción.
Se aísla el ADN que se desea clonar, por ejemplo, mediante cromatografía líquida o por centrifugación.
Si el ADN debe expresarse hayque añadir los segmentos reguladores de la expresión génica.

2. Preparación de un vector de clonación
El vector es el portador de la secuencia de ADN que se desea clonar. Un vector debe presentar las siguientes características:
Una pequeña secuencia de ADN fácil de aislar, como, por ejemplo, un plásmido.
Contener distintos puntos de ataque a enzimas de restricción y que sean conocidos.Poder ser incluido en la célula anfitriona con facilidad.
Replicarse de forma independiente al ADN de la célula anfitriona.
Poseer un gen marcador con el que puedan identificarse y seleccionar las células clonadas. Un ejemplo de marcador puede ser la resistencia a un antibiótico.
Las etapas del proceso consisten en:
1. Cortar el vector con enzimas de restricción, las mismas enzimas que seutilizaron  para cortar el ADN que se quiere insertar.
2. Unir el vector y el ADN que se va a clonar mediante los llamados extremos cohesivos, o pegajosos, o escalonados.
Una vez que el ADN ha sido introducido en el vector se denomina ADN inserto, o simplemente, inserto.
Los tipos de vectores que se utilizan suelen ser plásmidos, virus como el fago l, cromosomas creados de forma artificialy quimeras.
3. Formación del ADN recombinante
En esta etapa se produce la unión covalente del vector y el ADN inserto mediante una ligasa. Así se realiza el sellado de la llamada Mella, Muesca o Nick.
4. Introducción del ADN recombinante en la célula anfitriona
Para la clonación (replicación del ADN recombinante) se necesita la maquinaria celular. Por ello, hay que introducir el ADN recombinante enuna célula anfitriona.
Los tipos de células anfitrionas son:
Células bacterianas: son las más utilizadas, ya que tienen una alta velocidad de replicación, un bajo coste de mantenimiento de las colonias y son fácilmente manipulables.
Células eucariotas: aunque las células eucariotas son, en general, difíciles de mantener se usan levaduras y células tumorales:
Levaduras: se utilizan en procesos...