ADNcerdo 2015

Universidad Autónoma de Chiriquí
Facultad de Ciencias Naturales y Exactas
Escuela de Química

Informe de Bioquímica II

Experimento N°1
Aislamiento de ADN en el bazo de cerdo

Presentado por:

Sherlynn Petit 4-765-2209
Margarita Trejos 4-758-1914


Prof. Albertina Montenegro


Fecha de entrega: 31/08/2015








Aislamiento del ADN en el bazo de cerdo
Objetivos
Extraer ADN del bazo de cerdo.Reconocer la estructura fibrilar del ADN
Establecer cómo afecta la concentración del medio la solubilidad del ADN y demás proteínas.
Identificar el grado de pureza del ADN mediante espectroscopia UV
Resumen
El ADN es el componente principal de todas las células y el encargado de transmitir la información genética, se encuentra almacenado tanto en tejidos animales como vegetales, en el caso de estaexperiencia nos centraremos en la extracción de este componente en el bazo de cerdo. Para llevar a cabo dicha tarea, homogenizamos el tejido con ayuda de una licuadora, luego con la ayuda del citrato de sodio inhibimos la actividad de la Dnasa, finalmente mediante la adición de etanol el ADN fue aislado del agua provocando su precipitación, evidenciada por la formación de fibras, permitiéndonoscomprobar la estructura fibrilar del mismo.
Marco Teórico
La mayoría de células contienen ADN en sus núcleos celulares (excepto las anucleadas como los eritrocitos y plaquetas), sin embargo también se puede encontrar ADN dentro de otros compartimientos celulares como las mitocondrias y los cloroplastos (Bohinski, 2011).
Para seleccionar un tejido como fuente de ADN debe reunir 2 condiciones:contener gran cantidad de material genético y poseer baja actividad de DNAasa.
Debido a que el ADN se encuentra en el interior de núcleo celular es necesario homogenizar el tejido del cual se extraerá rompiendo las células para liberarlo y poder analizarlo. Factores como los iones Calcio y magnesio son importantes para la actividad de las DNAsas, así que se debe impedir la acción de estos utilizandoel citrato de sodio como inhibidor (Méndez, 2012)
La extracción de ADN se realiza en función de la solubilidad del mismo y demás proteínas, ya que, en un medio isotónico las proteínas son solubles y uno no isotónico el ADN se solubiliza, el solvente para otras moléculas será el cloroformo y el etanol frio servirá como agente precipitante (Mora, 2007)





Materiales y Reactivos
Bazo de cerdo,amortiguador salino (NaCl 0.5Mol/L), amortiguador con citrato de sodio pH 7, NaCl 2M, etanol al 80%, licuadora (Marca Oster), Vasos químicos de 50mL y 100mL Marca KiMax, probetas de 10mL y 50mL Marca KiMax, espátula, policial.
Nombre
Descripción
Toxicidad
Amortiguador Salino NaCl 0.5mol/L

Otros nombres: Cloruro sódico, Sal común, Sal de cocina, Sodio cloruro
Fórmula molecular NaCl
Propiedadesfísicas
Estado de agregación: Sólido
Apariencia: Incoloro; aunque parece blanco si son cristales finos o pulverizados.
Densidad: 2165 kg/m3; 2,165 g/cm3
Masa molar: 58,4 g/mol
Punto de fusión: 1074 K (801 °C)
Punto de ebullición: 1738 K

Inhalación: Irritación de la nariz y la garganta.
Ingestión: No presenta ningún efecto.
Piel: Posible irritación.
Las soluciones muy concentradas pueden ocasionarirritación. El polvo ocasiona enrojecimiento y puede ser perjudicial para los ojos.
Ojos: Alta presión sanguínea. Respiración rápida. Posible irritación de la piel por el contacto repetido.
Amortiguador de Citrato de Sodio pH 7
El citrato monosódico tiene la fórmula NaH2(C3H5O (COO)3.
Aspecto: líquido
Color: amarillento
Olor: picante (débil)
Valor de pH: (30,5 g/l agua; 20 °C): 6,2 - 6,6Solubilidad en agua: miscible
Inhalación: La sustancia es tóxica para las membranas mucosas.
Ingestión: nauseas.
Contacto con los ojos :irritante

Etanol al 80%

Fórmula: C2H6O
Densidad: 789,00 kg/m³
Punto de ebullición: 78,37 °C
Masa molar: 46,06844 g/mol
Punto de fusión: -114 °C
Presión de vapor: 5,95 kPa
Clasificación: Alcohol

Inhalación: Puede provocar dolor de garganta, tos, jadeo y dificultad...