Agente de diagnostico de sifilis

U.S.R. V.D.R.L.
Agente de diagnostico

Prueba rápida para la determinación de reaginas de la sífilis y otros treponemas
El U.S.R. (V.D.R.L.) en un reactivo de lectura microscópica utilizado para el diagnostico serológico de reaginas. La prueba se hace con plasma o suero no inactivado. Las llamadas reaginas son un tipo de anticuerpos que se presentan en suero de personas sifilicas o conel suero de personas con enfermedades agudas o crónicas
Cuando se mezcla un suero que contiene reaginas con el antígeno U.S.R. (V.D.R.L.) las partículas en emulsión floculan formando agregados visibles en microscopio con un objetivo seco débil y ocular de 10x, con lo que se obtien una amplificación de 100x. Por el contrario, un suero sin reaginas, no flocula a las partículas antigénicas, lascuales permanecen dispersas.
El V.D.R.L.es un antígeno estabilizado y no requiere preparación diaria para su uso, su realización es mas rápida y practica.

MATERIAL
Antígeno U.S.R. (V.D.R.L.)
Suero Control Positivo
Suero Control Negativo
Placas de reacción
Agitador rotatorio de 180 rpm
Solución salina 0.9% para pruebas cuantitativas

METODO
Para la obtención del suero, la muestra seobtiene por punción venosa y se deposita en un tubo de ensaye limpio sin anticoagulante, dejar coagular y separar el suero por centrifugación.
Para la obtención de plasma, se efectúa la misma operación que para la obtención del suero, pero usando tubos de ensaye que contenga cualquiera de los anticoagulantes comúnmente usados.
En la preparación de los sueros controles positivo y negativo, estos sereconstituyen con agua bidestilada a el volumen indicado en la etiqueta.

A.PRUEBA CUALITATIVA
1.- Colocar 0.05mL de suero o plasma problema en uno de los círculos de la placa.
2.- Homogenizar el reactivo mediante agitación ligera, perforar la tapa del gotero con la aguja Roma No. 21 sin bisel y ensamblarla al gotero, sujetar en posición vertical; dejar caer una gota (18L) de antígeno U.S.R.(V.D.R.L.) sobre la muestra de suero o plasma.
3.- Colocar la placa con las muestras en el agitador rotatorio a 180 rpm y poner en movimiento durante 4 mins. Cubrir con una placa de plástico para evitar la evaporación. Efectuar la lectura en un microscopio con un objetivo seco débil y ocular de 10x para obtener una amplificación de 100x.

CONTROLES
Negativo: colocar en un circulo una gota(0.05) de suero control negativo y adicionar una gota (18L) de antígeno U.S.R. (V.D.R.L.)
Positivo: El mismo procedimiento anterior pero utilizando el suero control positivo.
Colocar la placa con las muestras en el agitador rotatorio a 180 rpm y poner en movimiento durante 4 mins. Cubrir con una placa de plástico para evitar la evaporación. Efectuar la lectura en un microscopio con un objetivoseco débil y ocular de 10x para obtener una amplificación de 100x.

INTERPRETACIÓN
Negativo: No se observan grumos
Positivo Debil: Presencia de pequeños agregados
Positivo: Presencia de medianos y grandes agregados

B. PRUEBA CUANTITATIVA
Una vez identificadas las muestras positivas, se lleva a cabo la prueba cuantitativa haciendo una serie de disoluciones del suero problema en tubos. Cadadilución se prueba de manera idéntica a la descrita anteriormente para la prueba cualitativa.
Las diluciones del suero se efectuaran de la manera siguiente:
1.- Colocar 6 tubos perfectamente limpios en una gradilla y marcarlos del 1 al 6.
2.- Poner 0.5 mL. de solución salina al 0.9%, recién preparada a cada uno de los tubos con pipeta.
3.- Poner 0.5 mL. del suero del paciente la primer tubo,mezclar bien y transferir 0.5 mL. al tubo 2, mezclar bien y transferir al tubo 3. Continuar la misma operación hasta llegar al tubo 6, mezclar bien y descartar 0.5 mL. de éste último tubo.
Las diluciones efectuadas son las siguientes:
Tubo No. Dilución
1 1/2
2 1/4
3 1/8
4 1/16
5 1/32
6 1/64

Nota: En caso necesario (sueros muy potentes) se colocan más tubos.
4.- Colocar una gota de cada...