Aglutinacion

Técnicas de aglutinación

ANALIA PEREZ

OBJETIVOS
Comprender los distintos tipos de técnicas de aglutinación. Conocer su fundamento. Informar e interpretar en el contexto de una situación clínica.

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INTRODUCCIÓN
☺ Es la detección de anticuerpos empleando antígeno en estado particulado. También es útil para la detección de antígenos. ☺ Los principios que la rigen son losmismos que para precipitación. ☺ En ambos tipos de ensayos (directa e indirecta) el análisis puede ser cuali o semicuantitativo, aunque en algunos kits comerciales a partir del límite de detección del inserto se puede hacer una estimación cuantitativa. ☺ Son técnicas poco costosas, requieren poco materiales y son rápidas. ☺ Es una herramienta útil en el laboratorio de inmunología para la deteccióny hallazgo de diferentes patologías. ANALIA PEREZ

Recordando…
AGLUTINACIÓN

FLOCULACIÓN No se forman precipitados hasta que la cantidad de Ag añadido no exceda ciertos límites. Los floculos se agregan y sedimentan en rango estrecho de Ag/Ac.

Interacción AgAc → malla → precipitado. Ac → divalente y Ag → dipolivalente, distintos epítopes.
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AGLUTINACIÓN
1) 2) 3)
1)Prozona se da en la zona donde existe exceso de Ac frente al Ag, donde no se produce precipitación, originando falsos (-) por altas [ ] de Ac. Esta dificultad se elimina con diluciones seriadas estándar del suero. 2) Equivalencia 3) Postzona, se da en la zona de exceso de Ag, donde tampoco se da la precipitación, dando tb falsos (-). ANALIA PEREZ

Comparando…

• Los complejos se agregan ysedimentan en un rango muy estrecho de la relación Ag/Ac
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DIRECTAS

INDIRECTAS o PASIVAS

El antígeno es por sí mismo particulado, por lo que no requiere fijación a soportes inertes. Son aglutinadas directamente por los Acs. • Rápida: en placas • Lenta: en tubos o microplacas

Antígenos solubles unidos a glóbulos rojos o partículas inertes como el poliestireno, látex y bentonita.También pueden utilizarse bacterias como soporte (Micrococcus lysodeikticus).

• Rápida: en placas • Lenta: en tubos o microplacas
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Aglutinación
Aglutinación directa: Antígenos febriles: Salmonella y Brucella Grupo sanguíneo y Factor Rh Aglutinación directa en tubos: Determinación de isohemaglutininas en suero / plasma Prueba de Coombs directa e indirecta
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Test deaglutinación directa en tubos
Cuantificación de isohemaglutininas
Las isohemaglutininas (Anti A y Anti B) son Acs naturales clase IgM y menos frecuente IgG. Están presentes en todos los individuos, excepto en los del grupo AB. El Anti H se presenta en individuos A, B, AB dirigidos contra grupo sanguíneo A y B. Sus títulos son superiores a 1/8 UTILIDAD: ∗Inmunodeficiencias de Acs. ∗Tx de MO:Prueba mayor: GR donante-suero Rc Prueba menor: GR Rc + suero donante. La primera es más importante por que los GR que van a ser transfundidos se enfrenta a la totalidad del ANALIA PEREZ plasma del Rc in vivo.

PROCEDIMIENTO
Muestra : suero o plasma libre de hemólisis Reactivo : G.R. tipificados de humano (A, B o AB) Lavar con S.F.y luego resuspender en SF Se agregan los G.R. se homogeniza,centrifuga, agita suavemente y se observa la aglutinación. Se informa el título de isohemaglutininas de la muestra. Título de antisuero es la mayor dilución a la cual presenta aglutinación.

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Grupo Sanguíneo y Factor Rh
Prueba cualitativa para la determinación del grupo ABO y Rh. El tipo sanguíneo dependerá del Ag presente en la superficie del GR y el suero del paciente. • Los Agsdel sistema Rh son de naturaleza proteica. El antígeno D posee la mayor capacidad antigénica. • Quienes posean el factor Rh serán: Rh (+) • Quienes NO lo posean: Rh (-)
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PROCEDIMIENTO
Se enfrenta una gota de sangre entera del paciente con los reactivos compuesto por anticuerpos monoclonales dirigidos a los polisacáridos del GR y al factor Rh, Se utiliza antiA, antiB y anti Rh. es...