Agrobacterium rhizogenes en Lentejas

OBJETIVO GENERAL
Evaluar la inducción del enraizamiento con Agrobacterium rhizogenes en Lentejas.

OBJETIVOS ESPECIFICOS
• Evaluar el porcentaje para la inducción del enraizamiento en hojas, tallo y raíz de Lenteja
• Verificar la eficiencia de transformación genética en las raíces
• Probar diferentes métodos de infección del Agrobacterium rhizogenes para la inducción de la transformación enLenteja.

INTRODUCCIÓN
La transformación genética de plantas es un proceso por el cual el ADN extraño, es introducido al núcleo de las células vegetales, éstas pueden ser parte de un explante en un cultivo morfogénico o protoplastos. Una vez que el ADN es introducido, se regenera una planta completa transformada genéticamente partiendo de dichas células unicelulares transformadas. El ADN quese introduce le confiere ventajas a la planta para hacerla más resistente y productiva, junto con esta información es conveniente introducir genes que permitan saber que la inclusión del ADN extraño fue exitosa, dichos genes son los llamados marcadores de selección y reporteros, los cuales codifican para expresar ciertas enzimas, y mediante la detección de la expresión de estas enzimas específicas,es como se puede demostrar si el tejido está o no transformado. (Hernández, 2002)

La transformación genética de las plantas puede realizarse de las tres siguientes formas:
a) puede llevarse a cabo en forma directa, en la cual el ADN puro se introduce en forma directa a la célula (Microinyección, Electroporación, Polietilen-glicol y Biobalística).
b) en forma indirecta en donde el ADN primeroes introducido, a un microorganismo vector como un virus o bien Agrobacterium, mediante la cual posteriormente se introducirá al núcleo de la célula vegetal y (Virus y Agrobacterium).
c) mutagénesis de las plantas (Radiaciones con luz UV, rayos X y rayos gama). (Hernández, 2002)

Dentro de todas las técnicas previamente citadas, quizás la más versátil y ampliamente utilizada sea latransformación mediada por Agrobacterium.

Agrobacterium rhizogenes es una bacteria fitopatógena, la cual tiene tiene la característica de infectar principalmente a plantas dicotiledóneas, las cuales al ser dañadas físicamente secretan en forma natural como un sistema de defensa, compuestos fenólicos, de entre los cuales se encuentra la acetosiringona en una concentración de 100 µm, la cual le permite a A.rhizogenes realizar un reconocimiento bioquímico y molecular, hacia el tipo de células adecuadas para ser infectadas, de esta manera se activan los genes vir, los cuales a través del ADN-T Ri, permite la transformación genética de los tejidos. (Hernández, 2002)

Dicha integración le permite a las células transformadas biosintetizar su propio ácido indolacético (AIA), así como el de incrementarpor parte del tejido transformado la sensibilidad a reguladores de crecimiento, también producen una serie de compuestos nitrogenados (opinas), que utilizará posteriormente la bacteria para su crecimiento. Estas raíces tienen una tasa de crecimiento mayor respecto a las raíces normales, debido principalmente a su gran capacidad de ramificación, no requieren la aplicación exógena de auxinas, sonestables genéticamente, y presentan una elevada producción de metabolitos secundarios, varios de los cuales se ha comprobado que desempeña un papel importante en la interacción planta-microorganismo. Las plantas son la principal fuente de productos usados en la industria química como farmacéutica, saborizantes, colorantes, fragancias, y pesticidas. (Hernández, 2002)

CUESTIONARIO
1.- ¿Qué es laagrotransformación?
La transformación genética de especies vegetales es un sistema que permite insertar genes foráneos dentro de un tejido vegetal receptor para la creación de plantas genéticamente modificadas.
Dentro de las diversas técnicas de transformación la más utilizada es la mediada por Agrobacterium. El descubrimiento de la capacidad de esta bacteria de introducir ADN en células...