Agrolnomo

Páginas: 21 (5092 palabras) Publicado: 21 de abril de 2013
MVZ-Córdoba 2004; 9:(2), 414-427

ORIGINAL

VALIDACIÓN DE PCR PARA DETECCIÓN DE Listeria
monocytogenes EN CARNES CRUDAS DE RES Y POLLO
Kirvis Torres 1 , Raul Poutou 2 *, Ana Carrascal 1 , Sara Sierra 1 , Marcela Mercado 1,3
1 Laboratorio de Microbiología de Alimentos. 2 Laboratorio de Biotecnología Aplicada. Grupo de Biotecnología
Ambiental e Industrial. 3 Grupo de EnfermedadesInfecciosas. Departamento de Microbiología, Facultad de
Ciencias. Pontificia Universidad Javeriana, Bogotá, D.C. Colombia.
*Correspondencia: E-mail:rp000274@javeriana.edu.co

RESUMEN
Listeria monocytogenes es un microorganismo zoonótico emergente en la industria de alimentos, resultando de
gran interés para la salud pública. El objetivo de este trabajo fue validar la técnica de PCR para la detecciónde este microorganismo en carnes crudas de res y pollo. El procedimiento de extracción de ADN fue realizado
con lisozima, proteinasa K y fenol-cloroformo a partir de muestras contaminadas artificialmente. La especificidad
de los cebadores LI1 y U1 fue comprobada por la amplificación de una banda de 938pb correspondiente a un
fragmento del ADNr 16S; de igual manera los cebadores LF y LRamplificaron una banda del gen hly A de
750pb; lo que permitió la identificación de género (banda 938pb) y especie (banda de 750pb) respectivamente.
Las cepas de los otros géneros bacterianos ensayados no amplificaron ninguna de las bandas específicas. El
límite de detección para la PCR fue de 10 2 y 10 4 UFC/gr para carnes de res y pollo respectivamente; el «Gold
Standard» reportó 10 2 UFC/ml paraambos alimentos. La comparación de la PCR vs., el método «Gold Standard»
reportó en carne de pollo una concordancia observada de 98.43%, una sensibilidad del 96.9%, una especificidad
de 100%, un valor predictivo positivo del 100% y un valor predictivo negativo del 97%; para la carne de res
todos los parámetros anteriores fueron del 100%. Estos resultados demostraron la factibilidad de la PCR parael control de calidad de carnes crudas de res y pollo.
Palabras clave: Listeriosis; Listeria monocytogenes ; validación de PCR, carne de pollo; carne de res.

PCR VALIDATION FOR DETECTION OF Listeria monocytogenes
IN RAW BEEF AND CHICKENS
ABSTRACT
Listeria monocytogenes is a zoonotic emergent microorganism in the food industry, being from great interest for
the public health. The aim ofthis work was to validate the PCR technique for the detection of Listeria monocytogenes
in raw meats of beef and chicken. The DNA extraction procedure was carried out with lisozyme, proteinase K and
phenol-cloroform, starting from artificially contaminates samples. The specificity of primers LI1 and U1 was
verified by the amplification of a 938bp band corresponding to a fragment of rDNA 16S; inthe same way the
«primers» LF and LR amplified a band of 750bp corresponding to the hly A gene; allowing the genus (938bp
band) and species (750bp band) identification respectively. Other bacterial strains assayed did not amplify any
of the Listeria specific bands. The detection limit for PCR was of 10 2 and 10 4 UFC/gr on beef and chicken meat
respectively; the Gold Standard reported 10 2UFC/ml in both cases. The comparison of the PCR versus the Gold

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Standard method reported upon chicken meat an observed concordancy of 98,43%, a sensitivity of 96,9%, an
specificity of 100%, a positive predictive value of 100% and a negative predictive value of 97%; for beef all the
previously parameters were 100%. This results showed the feasibility ofthe PCR for the quality control on raw
beef and chicken.
Key words: Listeriosis; Listeria monocytogenes ; PCR validation, beef, poultry meat

INTRODUCCIÓN
La listeriosis humana forma parte del grupo de
enfermedades transmitidas por alimentos (ETA) y es
una enfermedad esporádica ocasionada por L .
monocytogenes . Los alimentos han sido el vehículo
principal de entrada de L . m o n o c y...
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