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PRACTICA N° 2

TÉCNICAS DE COLORACIÓN DIFERENCIAL:
GRAM Y ZIEHL NEELSEN, OBSERVACIÓN DE LÁMINAS CON COLORACIÓN ESPECIAL (ESPORAS), COLORACIÓN NEGATIVA

INTRODUCCIÓN

Los miembros del mundo procariote comprenden un vasto y heterogéneo grupo de organismos unicelulares. Este grupo incluye las eubacterias y las arqueobacterias.Los millares de especies bacterianas se diferencian por muchosfactores, entre los que se cuentan la morfología, la composición química de la pared celular (a menudo detectada por reacciones de tinción), los requerimientos nutricionales y las actividades bioquímicas.

Las células procariotes en su medio habitual, se caracterizan por ser bastante refringentes, además presentan una morfología y un tamaño muy variable entre 0,2 y 2,0 um de diámetro y presentan unade las tres morfologías siguientes: la esférica o de coco, la de bastoncillo y la espiral.La morfología de las bacterias se puede examinar de dos maneras: 1) observando los microorganismos vivos en suspensión, empleando coloraciones supravitales u 2) observando las células muertas en frotis seco y teñidas con diferentes procedimientos de coloración.

Las tinciones bacterianas facilitannotablemente el examen microscópico y permiten, además, el reconocimiento de ciertas estructuras externas. Estas pueden ser coloraciones simples, las cuales emplean un solo colorante para poner en evidencia la presencia de bacterias en una muestra y la forma que estas presentan. El colorante mayormente usado en este caso es el azul de metileno.

Las coloraciones compuestas o diferenciales, resultan sermucho más útiles, en las que se emplean dos soluciones de colorantes, como en los métodos Gram, y de Ziehl – Neelsen.Existen por ultimo, tinciones especiales de empleo más limitado. En unos casos pretenden aumentar el grosor bacterianos impregnación con sales de plata) y, en otros visualizar estructuras anatómicas, como flagelos, esporas o el cromosoma bacteriano.

PROTOCOLO

LÁMINASDescripción Esquema de la observación microscópica
GRAM
Bacterias Gram positivas







Resultado: Las bacterias gram positivas se tiñen de color azul violeta y las Garm negativas de color rojo

CUESTIONARIO N°1

1. ¿Cuál es el fundamento de la coloración Gram?
Se basan en las diferencias entre las paredes celulares de las bacterias Gram positivas y Gram negativas La pared celular delas bacterias Gram positivas posee una gruesa capa de peptidoglucano, además de dos clases de ácidos teicoicos: Anclado en la cara interna de la pared celular y unido a la membrana plasmática, se encuentra el ácido lipoteicoico, y más en la superficie, el ácido teicoico que está anclado solamente en el peptidoglucano (también conocido como mureína) Por el contrario, la capa de peptidoglucano de lasGram negativas es delgada, y se encuentra unida a una segunda membrana plasmática exterior (de composición distinta a la interna) por medio de lipoproteínas. Tiene una capa delgada de peptidoglicano unida a una membrana exterior por lipoproteínas. La membrana exterior está hecha de proteína, fosfolípido y lipopolisacárido. Por lo tanto, ambos tipos de bacterias se tiñen diferencialmente debido aestas diferencias constitutivas de su pared. La clave es el peptidoglicano, ya que es el material que confiere su rigidez a la pared celular bacteriana, y las Grampositivas lo poseen en mucha mayor proporción que las Gram negativas. La diferencia que se observa en la resistencia a la decoloración, se debe a que la membrana externa de las Gram negativas es soluble en solventes orgánicos, como porejemplo la mezcla de alcohol/acetona. La capa de peptidoglicano que posee es demasiado delgada como para poder retener el complejo de cristal violeta/yodo que se formó previamente, y por lo tanto este complejo se escapa, perdiéndose la coloración azul-violácea. Pero por el contrario, las Gram positivas, al poseer una pared celular más resistente y con mayor proporción de peptidoglucanos, no son...