aislacion de DNA

Universidad Interamericana de Puerto Rico
Recinto de Barranquitas
Departamento de Ciencias y Tecnología

Aislación de DNA Genómico, Plásmido y
Electroforesis de Agarosa

Karen Rivera Declet
BIOL 2013

Introducción:

La aislación del material nuclear de las células es un proceso relativamente sencillo. La
lisis de la pared celular da por resultado la liberación del material nuclear.En este laboratorio se
llevará a cabo una experimentación para aislar DNA genómico y plásmidos. Además de una
espectroscopia de DNA y el análisis mediante electroforesis de agarosa. Mediante el mismo, se
comprendió la importancia del proceso de aislación de DNA genómico, se cuantificó la
concentración de DNA genómico mediante espectrofotometría y se caracterizara el DNA
genómico mediante lamisma técnica.
Para la realización de un buen experimento es importante manejar correctamente las
técnicas que se utilizan al llevar a cabo el mismo. La aislación y espectroscopia de DNA es
esencial para poder realizar una buena electroforesis de agarosa. Por tanto, es de suma
importancia comprender el proceso de aislación de DNA genómico para así lograr obtener una
muestra del mismo para seranalizado. Por otro lado, también hay que tener en cuenta aprender a
comparar las técnicas de aislación convencionales con las comerciales en términos de pureza y
concentración del material genético de estudio. De esta manera se asegura obtener un buen
resultado a la hora de llevar a cabo la experimentación. Además, la utilización de los equipos a la
hora de llevar a cabo un experimento esfundamental, por ejemplo para cuantificar la
concentración de DNA genómico mediante espectrofotometría UV. También, caracterizar el
DNA genómico mediante el mismo factor.
No obstante, la electroforesis de agarosa es una de las técnicas más comunes utilizadas en
la biología molecular porque la misma separa fragmentos de DNA basándose en la diferencia de
tamaño (Negrón, J.A.; Meléndez, M.M(2012)). Por tanto aprender a como operar con el equipo
de electroforesis y las bases de la preparación del gel de agarosa es de suma importancia, además
saber identificar como se afecta la separación de acuerdo a la carga y el tamaño de la muestra. Al
estudiar esta técnica de electroforesis es esencial diferencial el DNA genómico, plásmido y RNA
de acuerdo a los resultados generados en el gel deagarosa.

Igualmente, mediante la

electroforesis de agarosa se puede lograr una cuantificación de la concentración de DNA
genómico y plásmido y también caracterizar el DNA de le mencionado anteriormente.

Procedimiento:
A) Aislación DNA Genómico:
Se transfirió 1.5ml de cultivo
bacteriano a un micro tubo
estéril, recordando las
medidas asépticas en todo
momento.

Luego se le añadióigual
volumen de fenol-cloroformo
y se mezclo por inversión
15x hasta que se mezclo
todo.

Se centrifugo la misma a
temperatura ambiente por 2
min. a 10,000rpm

Seguido se determino la
pureza y se preparo
una dilución 1:1000 y
se midió la absorbancia
en 260nm y 280nm.
Por último se coloco a
20°C para
posteriormente realizar
la electroforesis de
agarosa.

Luego se centrifugó elmicrotubo con el cultivo
bacteriano a una temperatura
ambiente por 2 min. a
5,000rpm

Se descartó el
sobrante dejando
el precipitado libre
de líquidos.

Se le añadió a lo realizado
anteriormente 30μl de SDS al
10% se mezclo y se incubo a
una temperatura de 95°C
durante 1 min.

Seguido se resuspendió el
precipitado en 457μl de
amortiguador TE 1X y se
pipeteo varias veces.

Elsobrenadante fue transferido
a un microtubo estéril nuevo t
se le añadió igual volumen de
fenol-cloroformo. Se mezclo
bien y se coloco en la
centrifuga por 2 mi. a
10,000rpm

Se transfirió el sobrante a
un microtubo nuevo, luego
se añadió
del
volumen de acetato de
sodio 3M

Al haber realizado el lavado se
dejo secar durante 2 min. Luego se
resuspendió el DNA en 100μl de
TE 1X o...