Aislamiento Bacteriano

cterianoi AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN BACTERIANA

DISCUSIONES:
* PRUEBA DE CATALASA: La catalasa es una enzima que descompone al peróxido de hidrógeno en oxígeno y agua, esta enzima es similar a la estructura de la hemoglobina. Excluyendo al género Streptococcus y algunos otros la mayoría de las bacterias aerobias y anaerobias facultativas tienen catalasa.
La base de esta pruebaes demostrar la presencia de la enzima catalasa, colocando 2 o 3 gotas al cultivo.
El resultado es positivo si en la colonia hay efervescencia. ( Burbujas) Ejemplos:
Catalasa (+): Staphylococcus aureus, Escherichia coli

* PRUEBA DE OXIDASA: Básicamente es la detección de la enzima oxidasa, muy útil en la identificación de bacterias Gram (-). La reacción de la oxidasa se debe a la presenciadel sistema de citocromo-oxidasa, la cual activa citocromos reducidos por oxígeno molecular, por la transferencia de un aceptor al estado terminal del sistema de transferencia de electrones.
El sistema de citocromos está generalmente presente en organismos aeróbicos. Un resultado positivo a la oxidasa consiste en una serie de reacciones en las cuales un componente auto-oxidable del sistema decitocromo es al final catalizado. Utilizando un tubo capilar con tetrametil-p-phenylendiamina al 1%, se adiciona una pequeña cantidad a un cultivo bacteriano colocado sobre un papel filtro y obtenemos las siguientes reacciones: una reacción positiva (presencia de oxidasa) se indica por la apariencia de un color púrpura obscuro en el papel, en menos de 10 segundos; al contrario una reacción negativa,que consiste en una ausencia de color púrpura, indica según los ejemplos:
Oxidasa (+): Pseudomona
Oxidasa (-): Escherichia coli



* Consideraciones Esta prueba no puede realizarse con colonias que provengan de medios de cultivo que contenga hidratos de carbono ni indicadores, por lo que si se la va a realizar se debe incubar los microorganismos en un placa de AS o bien un TSA(tripteina-soya-agar)

La fórmula del agar MacConkey II es de 1983 y se diseñó especialmente para mejorar su capacidad de inhibir el "swarming" de Proteus spp y para alcanzar una definitiva diferenciación entre fermentadores y no fermentadores de la Lactosa.
Este medio es ligeramente selectivo ya que la concentración de sales Biliares, que inhiben el crecimiento de los microorganismos Grampositivos, es baja en relación con otros medios similares. Se incluye también cristal violeta para inhibir el crecimiento de las bacterias Gram positivas, especialmente estafilococos y enterococos.
La diferenciación de organismos entéricos se lleva a cabo con la combinación de Lactosa con el indicador Rojo neutro.Se producen colonias rosas a rojas si el aislado es capaz de fermentar la Lactosa y coloniassin color en caso contario.
* Colonias lactosa (-): incoloras (= no hay fermentación de la Lactosa).  proteus, Pseudomonas .
* Colonias lactosa (+): rosa/rojo ladrillo rodeadas de un halo de sales biliares precipitadas. E. coli (rosa/roja), 

* DESPUÉS DEL AISLAMIENTO SE HACE LA IDENTIFICACIÓN BACTERIANA
SE UTILIZA 4 MEDIOS Y 2 ENTEROBACTERIAS (E.coli en la 1ºserie y Salmonella enla 2º serie)
* E. coli: No presenta turbidez, es inmóvil (-), no hay presencia de ácido sulfhídrico por eso el medio no se oscurece. Crece por el canal.
Salmonella: El medio se oscurece por la presencia de H2S .Es móvil (-): porque presenta turbidez.

Medio SIM (agar sulfuro indol movilidad) siembra: picadura

* Medio TSI (degradación de sacarosa, glucosa y lactosa) siembra: porpicadura y estría en superficie.
E. coli: Todo el medio presenta un color amarillo por tanto se degrada los 3 azucares No se oscurece (no hay H2S en el medio)
Salmonella: No consume los 3 azucares. Si hay ácido sulfhídrico por lo tanto se negrea y se enrojece .Si hay formación de gas, hay ruptura.


* E. coli: No consume el citrato, debido que no utiliza...