Aislamiento de anticuerpos contra el vih mediante librerías de bacteriófagos

1. Librerías de ADN o genotecas……………………………………........
2. Diseño y construcción de una genoteca genómica………………………
3. Librerías de bacteriófagos (Phage library)……………………………….
4. Construcción de una librería de fagos……………………………………
5. Aplicaciones de las librerías de fagos
I. Phage display………………………………………………………
II. Producción de anticuerpos contra distintas proteínas (neuropeptidos,receptores…)……………………………………………………….
III. Producción de anticuerpos contra patógenos de enfermedades: malaria, Hepatitis A, Hepatitis B, Hepatitis C, VIH………………
IV. Producción de anticuerpos contra proteínas de la envuelta del virus del SIDA ………………………………………………………….
6. Bibliografía………………………………………………………………..

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1. LIBRERÍAS DE ADN O GENOTECAS
Se define unalibrería genómica como un conjunto de clones en el que está representado todo el genoma de un organismo. Los clones suelen ser bacterias. El tamaño de la librería dependerá del tamaño del genoma y del tamaño medio de los fragmentos individuales (insertos). Así pues, si para tener una probabilidad del 99% de haber clonado una secuencia concreta en levaduras se necesita construir unos 4000recombinantes con un tamaño de inserto medio de 20 kb, en humanos se requieren cerca de un millón de clones individuales. Ese número de vectores recombinantes se puede estimar según una fórmula desarrollada por Clarke y Carbón (1976).
2. DISEÑO Y CONSTRUCCIÓN DE UNA GENOTECA GENÓMICA
Para crear una genoteca genómica se recolectan las células y se rompen, lo que produce la liberación de su ADN y otroscontenidos celulares en una solución acuosa. Existen varios métodos para aislar el ADN de los otros contenidos celulares. En uno de ellos se agrega fenol (un solvente orgánico que no se mezcla bien con el agua) a la mezcla que entonces se agita. Las proteínas provenientes de las células se asocian con el fenol, mientras que el ADN y el ARN permanecen en la solución acuosa, que se eliminan medianteuna pipeta. Luego, los ácidos nucleicos se precipitan en esta solución cuando se agrega alcohol frío. El ARN puede eliminarse por el agregado de una enzima que degrada el ARN pero no el ADN.
Una vez extraído el ADN se corta en fragmentos mediante el uso de una enzima de restricción para digerirlo durante el período limitado (digestión parcial), de modo que solo se cortan algunos de los sitios derestricción de cada molécula de ADN. Debido a que los sitios de corte son al azar las diferentes moléculas de ADN se cortarán en lugares diferentes se producirá un conjunto de fragmentos superpuestos. A continuación los fragmentos se unen a vectores plásmidos, fagos o cósmidos, que pueden transferirse a las bacterias. Esta técnica produce un conjunto de células bacterianas o partículas fágicas quecontienen los fragmentos genómicos superpuestos. Algunos clones contienen el gen de interés completo, unos pocos contienen partes del gen, pero la mayoría contiene fragmentos que no tienen ninguna parte del gen de interés.
Una genoteca genómica debe contener un número importante de clones para garantizar que todas las secuencias de ADN del genoma estén representadas en ella. Una genoteca delgenoma humano formada mediante el uso de cósmidos, en el que cada uno porta un fragmento de ADN al azar tiene una longitud de 35.000 a 44.000 pb, requeriría alrededor de 350.000 clones cósmidos para proporcionar una posibilidad del 99% de que cada secuencia esté incluida.

3. LIBRERÍAS DE BACTERIÓFAGOS (PHAGE LIBRARY)
¿QUÉ SON LOS BACTERIÓFAGOS?

Los bacteriófagos (también llamados fagos -delgriego phageton, alimento/ingestión) son virus que infectan exclusivamente a bacterias.

Al igual que los virus que infectan células eucariotas, los fagos están constituidos por una cubierta proteica o cápside en cuyo interior está contenido su material genético, que puede ser ADN o ARN de simple o doble cadena, circular o lineal (en el 95% de los fagos conocidos es ADN de doble cadena), de...