AislamiEnto De Arn En Levadura

LABORATORIO No. 18
AISLAMIENTO DE ARN EN LEVADURA

Objetivos:
1. Aislar muestras de ARN provenientes de levadura.

Marco teórico:
Los ácidos nucleicos son compuestos nitrogenados de elevado peso molecular que se pueden encontrar en las células asociadas a proteínas formando complejos llamados núcleo-proteína. Estas proteínas tienen carácter básico mientras que los ácidos nucleicos sonácidos. Se conocen dos grupos de ácidos nucleicos: ARN (acido ribonucleicos) y el ADN (acido desoxirribonucleico). La hidrólisis controlada de ARN y ADN produce nucleótidos. Si la hidrolisis continua se produce nucleósidos y finalmente fosfatos, azucares y bases púricas y pirimidínicas.
El producto básico de extracción de ARN consiste en el tratamiento del homogenizado con disolvente orgánico comoel fenol, cloroformo o ambos. La solución concentrada de fenol rompe los enlaces de hidrogeno de las macromoléculas, causando desnaturalización de las proteínas.
Para evidencias la presencia de ácidos nucleicos en extractos celulares vegetales se requiere células en cantidad suficiente y en medio libre de interferencias que puedan causar lisis celular o hidrólisis de los ácidos nucleicos pornucleasas. Una completa extracción de ácidos nucleicos es fundamental para la determinación indirecta.
Materiales y reactivos
* Tubos de ensayo
* Probeta
* Vaso químico
* Centrifugadora
LEVADURA SECA | El extracto de levadura es un extracto soluble en agua, es un hongo microscópico unicelular y diminuto que existe alrededor nuestro, en la tierra, en las plantas e incluso en el aire.|
CLOROFORMO | CHCl3, PM= 119,38, PE= 61,05°C, PF= -63,65°C, en liquido es transparente e incoloro, en solido, con olor característico, efectos en piel cuando tiene forma liquida, no es doloroso, pero provoca arrugas, es corrosivo al contacto con tejidos. |
ACETATO DE POTASIO | KCH3COO, PM= 98.14 g/mol, PF= 292ºC, polvo cristalino, soluble en agua, dolor de garganta, enrojece la piel y ojos |ETANOL | CH3CH2OH, liquido incoloro, densidad 789 kg/m3, PM= 46.07 g/mol, PF= -114.3ºC, PE= 78.4ºC, no combustible, provoca tos, dolor de cabeza. |
ÉTER ETÍLICO | C4H10O, PE= 35ºC, PF= -116ºC, PM= 74.12 g/mol, liquido incoloro, con olor dulce, causa nauseas, vomito, mareos. |
DIFENILAMINA | C12H11N, PM= 169.23 g/mol, solido, cristal blanco, con olor dulce floral, es nocivo, irrita, escombustible, reactivo leve, irrita membrana mucosa, debilita. |
ORCINOL | C7H8O2, PM= -142.16 g/mol, PE= 290ºC, PF= 50-60ºC, olor característico, solido cristalino blanco, ligeramente soluble en agua, al inhalar es corrosivo, sensación de comezón. |
ÁCIDO PERCLÓRICO | ClHO4, PM= 100.46, liquido, incoloro, olor ocre, PF= -112ºC, PE= 19ºC, miscible en agua, al inhalar es corrosivo, sensación decomezón. |

Esquema Experimental

Resultados

Extracción de ARN
Gramos de levadura= 15 g
Peso del papel= 1,06 g
Peso del papel + muestra de ARN extraído= 1,62 g
% de rendimiento de ARN obtenido: 3,73 %

Cálculos
1,62g-1,06g=0,56g % de rendimiento=0,56 g15 gx 100%=3,73%

Pruebas de caracterización de ácidos nucleicos

PRUEBA | COLOR | INTERPRETACIÓN |Precipitación con sulfato de amonio | | + |
Pruebas de Difenilamina | | + |
Prueba de Orcinol | | + |

Discusión

En la primera parte de este laboratorio fue un poco sencillo debido a que el ARN de la levadura se extrajo homogenizando con cloroformo, esta solución concentrada rompió los enlaces de hidrógenos haciendo que haya una desnaturalización de la proteína. La fase líquida se centrifugapara obtener un precipitado el cual contenía el ADN y la parte contenía los carbohidratos y el ARN que era lo que más nos interesaba. El ARN se lavo con etanol para así eliminar el ARN que hubiera quedado en la fase acuosa y también las impurezas para al momento de pesar la muestra obtenida pudiéramos obtener un peso cuyo porcentaje de rendimiento fuera lo más cercano a 4%, obteniendo así para...