Aislamiento De Bacterias Degradadoras Del Herbicida 2,4-D

AISLAMIENTO DE BACTERIAS DEGRADADORAS DEL HERBICIDA 2,4-D Y EVALUACIÓN DE LOS PORCENTAJES DE REMOCIÓN EN MEDIO LÍQUIDO
(Guión presentación-ponencia oral: XLVII CONGRESO NACIONAL DE CIENCIAS BIOLÓGICAS)

Presentación proyecto: [diapositiva 1]
Buenas tardes, Mi nombre es Carolina Ortiz/Marcela Vergara, soy estudiante de 8°/7° semestre de Biología de la Universidad Icesi. El presente trabajó serealizó como un proyecto de investigación en el marco de la materia Laboratorio de Biotecnología. El trabajo se titula: Aislamiento de bacterias del suelo degradadoras del herbicida 2,4-D y evaluación del porcentaje de remoción del herbicida en medio líquido.
Introducción [diapositiva 2]
Herbicida 2,4-D o ácido diclorofenoxiacético, es un compuesto Xenobiótico derivado del ácidofenoxiacético, que se utiliza en el control de arvenses de hoja ancha. Está presente en más de 1.500 productos como ingrediente activo. Debido a que su estructura química es muy estable, presenta una lenta degradación en el ambiente, una alta solubilidad y una fácil lixiviación.
-Es importante la degradación de este compuesto (el cual está prohibido en muchos países, o clasificado como de severarestricción), ya que por medio de la lixiviación este llega a las fuentes de agua, tanto superficiales como subterráneas, contaminando otros ecosistemas que rodean el área de aplicación. Produciendo transformaciones fisicoquímicas y microbianas del suelo. (Daña a insectos benéficos, posee efectos mutagénicos, teratogénicos y fetotóxicos, no solo a las plantas destinatarias sino a todo lo que entre en contactocon el herbicida).

Introducción [diapositiva 3]
Este compuesto aromático clorado, se puede degradar por medio de oxigenasas, que rompen el anillo aromático y le remueven los cloros a la molécula, generando compuestos que se pueden metabolizar en el ciclo del ácido cítrico. Estas enzimas presentes en algunas bacterias capaces de degradar el herbicida y otros compuestos fenoxiacéticos, soncodificadas por la familia de genes tfd presentes en el plásmido pJP4.
(Por si preguntan actúa como una fitohormona, “herbicida hormonal”, actuando de modo parecido a la hormona natural auxina (AIA), causa un rápido crecimiento celular y las plantas mueren cuando sus sistemas de transporte son bloqueados y destruidos por el crecimiento anormalmente acelerado)
Objetivo [diapositiva 4]
Por estoel objetivo de esta investigación, es: Seleccionar, aislar y evaluar cepas bacterianas a partir de suelos cultivados, que sean capaces de degradar este herbicida, para un uso potencial en la investigación en biorremediación en ambientes contaminados con el herbicida y otros compuestos xenobióticos.
-Básicamente este trabajo se dividen en 3 componentes principales: un componente microbiológico(aislamiento e identificación cepas), un componente químico (evaluación de los porcentajes de degradación del herbicida por medio de las cepas) y un componente molecular (amplificación por PCR de los genes involucrados en la degradación del herbicida, presentes en el plásmido pJP4).
Metodología: toma de muestras de suelo [diapositiva 5]
Las muestras del suelo se tomaron según la norma técnicacolombiana, en la vía Cali-Palmira de 2 lotes cultivados por más de 12 años, cada lote de una Ha. Se tomaron diferentes muestras de cuadrados de 20X20 cm a una profundidad de 15 a 20cm. Estas muestras se guardaron en bolsas negras y se encubaron a -4°C por un día.
Metodología: Enriquecimiento, dilución base 10 y siembra en medios selectivos: [diapositiva 6]
-Para el enriquecimiento de lasmuestras, se utilizó un medio selectivo (más el herbicida en una concentración de 200ppm). Se incubaron a 30°C y a 160 rpm durante 3 semanas (cada semana se cambiaba el medio). Este medio con el herbicida es un medio selectivo que introduce una presión en el ambiente de las bacterias, estás pueden tomar otras fuentes de carbono presentes en el suelo, pero deben resistir el herbicida.
(Por si...