Aislamiento De Dna

Aislamiento de DNA Genómico de Células
Eucarióticas

Objetivos

Enumerar los tres procesos que resultan en el aislamiento del DNA.
Describir el papel que juega cada reactivo en el proceso de aislamiento de DNA.
Aislar DNA cromosómico de material vegetal.

Introducción

A pesar de que no podemos ver el DNA, ésta es una macromolécula enorme y
abundante que se encuentra de formabien empacada dentro de la célula. El gDNA es el
DNA genómico o el DNA que forma los cromosomas y que contiene los genes. Su
aislamiento podría parecer una tarea complicada, por la gran cantidad de sustancias
ajenas al DNA que hay en la célula; sin embargo, no lo es.
El aislamiento del DNA es el primer paso para estudiar y caracterizar los genes en una
célula. En el caso de célulaseucariotas, este proceso conlleva invariablemente tres
pasos separados: la homogenización, la desproteinización y la precipitación del DNA. En
este ejercicio practicarás los tres pasos para aislar DNA de células de cebolla. ¡No te
imaginas cuánto DNA hay en un poco de tejido! Debes guardar el DNA que aislarás a
-20C, ya que se utilizará en experimentos posteriores durante el semestre.
El DNAlo guardarás en el congelador en una caja rotulada Destrezas II y el nombre del
profesor) en la mesa correspondiente a tu grupo. Utilizarás el código en las páginas 49 y
66 sección B6 para rotular todos los materiales.
Mas adelante en el ejercicio 6 ustedes aislarán DNA de plásmido. A esto se le llama Plasmid
DNA miniprep. Desde ahora debes tener en tu mente cuáles son las diferenciasen su
aislamiento. ¿Cómo se aísla el DNA genómico y cómo se aisla el DNA cromosómico o
genómico? Por ejemplo, una bacteria tiene DNA genómico y muchas bacterias tienen
plásmido s. ¿Cómo separamos el uno del otro? ¿Qué característica tienen cada uno que nos
permiten separarlos de forma pura cada uno? Debes tener en mente que el DNA rodea a
unas proteínas llamadas histonas (consulta cap.6 Campbell et al., 2009). ¿Aislaste el DNA
de forma pura o todavía tiene proteínas contaminantes? Siempre vas a tener proteínas
contaminantes, pero si se obtiene una proporción de ácidos nucleicos a proteína mayor de
1.8 se dice que es buena o aceptable para hacer experimentos subsiguientes. Esa
proporción se obtiene dividiendo la absorbancia de la muestra a 260nm por la absorbancia
a280nm. Eso nos da el índice de pureza. No lo confundas con la concentración que es la
cantidad de DNA por unidad de volumen, por ejemplo, 1.5 µg/µl. Esto quiere decir que se
obtuvo 1.5 microgramos por cada microlitro. El microlitro es la unidad que se usa ya que
casi nunca tenemos 1ml de la muestra.

materiales

Un set de tres micropipetas (p10, p100 y p1000)
Una caja de cada uno delos tips p10, p100 y p1000
50 g de cebolla por cada grupo de 2 estudiantes.
Cuchillo o navaja de un filo
1 beaker de 400ml
1 beaker de 600 ml
1 beaker de 1000ml
1 Hielera con hielo
2 papel de filtro de café
1 Probeta de 100 ml (una por mesa)
2 varillas o agitadores de vidrio
2 jeringuillas de 2 ml con aguja #22
Un beaker con microtubos Eppendorf de 1.5 ml (y una bolsa extra en lamesa prof.)
2-3 goteros plásticos
Reactivos
Un tubo de ensayo pequeño con 8 g de NaCl
Un tubo de ensayo pequeño con 8 ml de detergente Palmolive verde (original)
Varias pipetas de 10 ml
Una botella frosted glass de cloroformo con aprox. 8 ml (en el congelador)
Una de las siguientes por salón
Savant Vacuum system
Licuadora (dos o tres por salón)
14 tubos cónicos de 50 ml para centrífuga.Baño de María encendido a temperatura de 65ºC
Guantes small, médium y large – una caja (uso personal de los estudiantes)
Agua destilada- un botellón
Etanol 95% frío en el congelador – varios por salón
Un rack de agua ultra pura en tubitos Eppendorf en el congelador -20ºC

Procedimiento

1. Corta la cebolla (50 g) en pedazos ni muy grandes ni muy pequeños y colócala en un
beaker de...