Aislamiento De Dna
Páginas: 2 (321 palabras)
Publicado: 17 de febrero de 2013
AISLAMIENTO DE DNA DE ARQUEOBACTERIAS HALOFÍLICAS. ELECTROFORESIS DE AGAROSA.
Tenemos un cultivo de bacterias halofilicas cuya concentración en sal es muy alta, por ello son fáciles de lisarcuando las tratamos con agua y al mezclarle fenol los ácidos nucleicos los obtenemos en la fase acuosa y las proteínas en la fase fenólica. Al adicionar etanol, los ác. Nucleicos de alto peso molecularprecipitan como un material fibroso blanco; ese material es el ADN que nosotros queremos aislar. Cuando lo tengamos aislado le hacemos una electroforesis en un gel de agarosa.
CUESTIONES:
1).¿Cuándo se considera que el DNA obtenido es de alto peso molecular, cualitativamente?
Cuando ponemos el ADN en las calles del gel, podemos ver que en unas el ADN ha recorrido más espacio y otras seencuentran en la parte superior del gel. Las de alto peso molecular migraran menos y las del peso molecular pequeño, nos las encontraremos en la parte inferior.
Consideraremos que tienen alto pesomolecular si no ha recorrido mucha distancia en las calles del gel.
2). ¿Qué características se observa para considerar si estaba fragmentado?.
Si no está fragmentado veremos una sola banda y en elcaso de que lo esté, se verán muchas bandas o incluso una mancha borrosa de color azul (tinte).
3). ¿Cómo se calcularía la concentración de DNA obtenido, de forma cualitativa y cuantitativa?.
Deforma cualitativa, cuando más intensidad más fluorescente será la banda y por lo tanto más concentración. La intensidad viene referida por la cantidad de bromuro de etidio, al haber más bromuro haymás concentración de DNA.
De forma cuantitativa, cogemos una calle del gel, la ponemos en un patrón en la que cada banda tiene un concentración, y donde tengamos la muestra, ahí estará nuestraconcentración.
Otra forma cuantitativa es calculando la absorbancia de la disolución de DNA a 260nm, y sabiendo el coeficiente de extracción molar ( ) podríamos calcular la concentración: Abs =...
Tenemos un cultivo de bacterias halofilicas cuya concentración en sal es muy alta, por ello son fáciles de lisarcuando las tratamos con agua y al mezclarle fenol los ácidos nucleicos los obtenemos en la fase acuosa y las proteínas en la fase fenólica. Al adicionar etanol, los ác. Nucleicos de alto peso molecularprecipitan como un material fibroso blanco; ese material es el ADN que nosotros queremos aislar. Cuando lo tengamos aislado le hacemos una electroforesis en un gel de agarosa.
CUESTIONES:
1).¿Cuándo se considera que el DNA obtenido es de alto peso molecular, cualitativamente?
Cuando ponemos el ADN en las calles del gel, podemos ver que en unas el ADN ha recorrido más espacio y otras seencuentran en la parte superior del gel. Las de alto peso molecular migraran menos y las del peso molecular pequeño, nos las encontraremos en la parte inferior.
Consideraremos que tienen alto pesomolecular si no ha recorrido mucha distancia en las calles del gel.
2). ¿Qué características se observa para considerar si estaba fragmentado?.
Si no está fragmentado veremos una sola banda y en elcaso de que lo esté, se verán muchas bandas o incluso una mancha borrosa de color azul (tinte).
3). ¿Cómo se calcularía la concentración de DNA obtenido, de forma cualitativa y cuantitativa?.
Deforma cualitativa, cuando más intensidad más fluorescente será la banda y por lo tanto más concentración. La intensidad viene referida por la cantidad de bromuro de etidio, al haber más bromuro haymás concentración de DNA.
De forma cuantitativa, cogemos una calle del gel, la ponemos en un patrón en la que cada banda tiene un concentración, y donde tengamos la muestra, ahí estará nuestraconcentración.
Otra forma cuantitativa es calculando la absorbancia de la disolución de DNA a 260nm, y sabiendo el coeficiente de extracción molar ( ) podríamos calcular la concentración: Abs =...
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