Aislamiento de hongos en alimentos

INFORME

Romina Centofante
Grupo Nº 1
Fecha de entrega: 27/05/2010
Profesora: Dra. Vanesa Ludemann
Instructores: Ing. Analía Gomez
Ing. María Verónica Kyanko

Trabajo Práctico Nº 3: Métodos de enumeración, aislamiento e identificación de hongos en alimentos


Muestras:
1- Granos de girasol enteros y molidos;
2- Naranja contaminada con hongos.PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

Método de Plaqueo directo:
Se tomaron 20 granos de girasol y se desinfectaron sumergiéndolos en agua lavandina diluida 1:10 durante 2 minutos. Luego fueron enjuagados con agua destilada estéril 2 veces, se colocaron sobre papel absorbente y fueron sembrados 10 granos en una placa con medio PDA y otros 10 en una placa con DG-18. Las placas fueron incubadasdurante 7 días a 25°C y después de ese tiempo se realizó el recuento de mohos.
Por otro lado, se tomaron 20 granos y fueron sembrados directamente sobre 2 placas, una en medio PDA y otra en medio DG-18(10 granos por placa). También se incubaron a 25°C durante 7 días y se realizó el recuento de mohos.

Método de Diluciones:
Una muestra de granos fue molida y se pesaron 10g de lamisma diluyéndolos en 90 ml de agua de peptona 0,1% p/v. Se realizó otra dilución 1:10, y se sembraron ambas diluciones (10-1 y 10-2) en superficie, utilizando los medios DG-18 y DRBC. Dichas placas fueron incubadas durante 7 días a 25°C para un posterior recuento de mohos.

Luego del recuento se inocularon los diferentes hongos que aparecieron en las placas de ambos métodos, sembrándolos enmedios PDA para poder aislarlos. Se utilizó una placa para cada hongo y se las incubó durante 7 días a 25°C para así identificar los diferentes géneros mediante el uso del microscopio.


Método de aislamiento directo:
Se tomó una porción del hongo proveniente de la superficie de la naranja y se sembró en un medio PDA, realizando 3 pinchazos equidistantes. Se incubó la placa a 25°Cpor 7 días.

RESULTADOS

Granos de girasol en DG-18
- Plaqueo: % de granos contaminados

*Placa 1 - Desinfectados: Se observaron mohos más divididos y se diferenciaban mejor. Todos los granos resultaron contaminados, por lo tanto informamos 100% de granos contaminados.

*Placa 2 - No desinfectados: Se observaron mohos en gran cantidad. Todos los granos resultaroncontaminados, por lo que informamos 100% de granos contaminados.

Granos de girasol en PDA
* Placa 1 - Desinfectados: Se pudieron observar hongos espaciados, de varias morfologías. Informamos 100% de granos contaminados.

* Placa 2 - No desinfectados: La placa estaba cubierta por hongos invasores, lo cual no se pudieron visualizar los demás hongos presentes en la misma. 100% de granoscontaminados.

Granos molidos
- Diluciones: Recuento de mohos

10-1 10-2
Placa DG-18 23 4
Placa DRBC 19 8

En ambos medios el recuento es menor al rango establecido por APHA (25 - 250 ufc), entonces seleccionamos el valor de la placa de menor error.
En DG-18: 23 ufc. A este valor lo multiplicamos por el factor de dilución correspondiente, y como sembramos ensuperficie (0,1ml) multiplicamos por 10: 23x10x10. Por lo tanto informamos que el recuento fue de 2300 ufc/g estimado.
En DRBC: 19 ufc. A este valor lo multiplicamos por el factor de dilución correspondiente, y como sembramos en superficie (0,1ml) multiplicamos por 10: 19x10x10. Por lo tanto informamos que el recuento fue de 1900 ufc/g estimado.

Aislamiento de hongos:
- De los repiques enPDA, se obtuvieron las siguientes observaciones macroscópicas:

R1: Muestra proveniente de los granos desinfectados - DG-18:
Se observó del anverso, un hongo con textura flocosa, color verde oliva claro hacia el centro y grisáceo hacia los bordes, y tenía un crecimiento radial sin surcos. Del reverso era de color ámbar con manchas negras.

R2: Muestra proveniente de los...