Aislamiento de la caseína

Propuesta de trabajo experimental laboratorio bioquímica QIM-117
Proteínas, caseína
Objetivo general:
Aislar y purificar una proteína.Objetivo específico:
Aislamiento y purificación de la caseína de la leche
Cuantificación de la proteína caseína de la leche.

Fundamentos
La caseína es una de las proteínas más importante de laleche, se encuentra formando un complejo con calcio llamado caseinógeno en estado micelar(1). Su concentración en la leche es aproximadamente 35 g/L. La mayoría de las proteínas presentan unamínima solubilidad en su punto isoeléctrico y este principio se utiliza para poder separar la caseína ajustando el pH de la leche entre 4.6 - 4.8(2), donde se encuentra su punto isoeléctrico. Lacaseína ácida es insoluble en alcohol, agua y disolventes orgánicos lo cual permite remover la grasa de las preparaciones (3).
Método de Bradford sirve como método de cuantificación de proteínas, sebasa en la unión de un colorante, Comassie Blue G-250 (también Serva Blue) a las proteínas. El colorante, en solución ácida, existe en dos formas una azul y otra naranja. Las proteínas se unen a laforma azul para formar un complejo proteína-colorante con un coeficiente de extinción mayor que el colorante libre.(4)
Materiales (2)
Leche 1L
Amortiguador deacetato sódico (0.2 mol/l, pH4.6).
Etanol (95% v/v).
Éter
Termómetros de 0 a 100°C.
Muselina
Embude Buchner y papel filtro
Mechero
Vaso precipitado de 500ml
pHmetro
Agua destilada
Reactivo debradford
EspectrometroUV/VIS
4 soluciones estándares de caseína ( 0,5mg/ml)
Matraz

Procedimiento(2)
En el vaso precipitado de 500ml colocar 100 ml de leche y luego calentar a 40°C.Calentar 100ml de amortiguador de acetato sódico y añadir lentamente , agitando.
Medir el pH final de la mezcla , debe ser aproximadamente 4.8
Enfriar la suspensión a temperatura ambiente y...