aislamiento de lipidos

 AISLAMIENTO E IDENTIFICACION DE LIPIDOS






UNIVERSIDAD DE SUCRE
FACULTAD DE EDUCACION Y CIENCIA
PROGRAMA DE BIOLOGIA
BIOQUIMICA II
SINCELEJO – SUCRE
2013
OBJETIVOS
OBJETIVO GENERAL
Identificar los diferentes lípidos presentes en yema de huevo o grasa animal mediante su separación por la técnica de cromatografía de capa fina (TLC).
OBJETIVO ESPESIFICOCalcular valores de Rf de varias sustancias.
Deducir, a través del Rf la relación que existe entre la polaridad de las sustancias que se analizan y la de los eluyentes utilizados.
Aplicar la técnica de (TLC) como criterio de pureza e identificación de las sustancias.
Reconocer los lípidos separados mediante el empleo de un revelador (yodo), el cual puede variar con la clase de lípido

MARCOTEORICO
Los lípidos conforman un grupo grande y heterogéneo de sustancias de origen biológico fácilmente solubles en disolventes orgánicos como el metanol, la acetona, el cloroformo y el benceno. No poseen pesos moleculares elevados forman polímeros de alto peso molecular a diferencia de otras biomolecular, llevan a cabo múltiples funciones en el organismo.
El tejido adiposo está constituidoprincipalmente por las grasas neutras, los constituyentes lipídicos de estos tejidos son los lípidos complejos como: fosfolípidos y colesterol. Basados en la solubilidad de los lípidos en solventes orgánicos, es posible extraer y purificarlos mediante sucesivas extracciones.
Cromatografía en capa fina (TLC)
Aunque la incluyamos en este apartado, la TLC puede ser, de acuerdo con la composición de lacapa cromatografía y de su forma de preparación, bien de reparto o de adsorción. Así, si la capa de adsorbente se deposita como una suspensión acuosa que se deja secar a temperatura ambiente (caso más frecuente), será la película de agua depositada sobre las partículas de adsorbente quien actuará de fase estacionaria, por lo que con solventes orgánicos la partición supondrá, al menosmayoritariamente, equilibrios de reparto líquido-líquido (cromatografía de reparto). Por el contrario, si la capa de adsorbente se seca por calentamiento en estufa, la partición supondrá equilibrios de adsorción sólido líquido (cromatografía de adsorción).
En este método se utilizan como soporte placas de vidrio, plástico, aluminio, etc. en las que se deposita una fina capa de adsorbente (gel de sílice,almidón, polvo de celulosa, etc.) cuyo espesor puede ajustarse a conveniencia. En el mercado se encuentran disponibles ya fabricadas placas comerciales.
A la altura de 1,5 cm (aproximadamente) de una de las bases se marca débilmente con un lápiz fino una línea teniendo cuidado de no romper la capa adsorbente. Esta línea servirá de base para situar las muestras a analizar. Con una micropipet devaciado automático se depositan 5 µl sobre un punto o varios en la línea de base (línea de aplicación) teniendo siempre cuidado de no tocar la placa con la punta de la pipeta para no dañarla. Tras aplicación de la muestra, se deja secar a temperatura ambiente o con ayuda de un pequeño secador. A continuación la placa se introduce en una cubeta que contiene el disolvente de desarrollo adecuado en cadacaso, cuyo nivel no debe nunca llegar a la línea de siembra. Su ascenso por capilaridad produce el efecto cromatográfico. Si se realizan dos desarrollos consecutivos con eluyentes apropiados en cada caso, se habla de cromatografía bidimensional. Las sustancias se visualizan en la placa una vez desarrollada mediante su color, absorción ultravioleta o revelado específico que produce una reaccióncoloreada. Para su cuantificación, se raspa la parte donde se ubique el componente que se quiere medir, se extrae con los disolventes adecuados y se analiza según el método empleado.
La diversidad de adsorbentes (ver anteriormente) y eluyentes disponibles, permiten que esta técnica sea de utilidad para separar e identificar un amplio repertorio de biomoléculas: aminoácidos, hidratos de...