Aislamiento de microorganismos en un medio de cultivo

PRÁCTICA 5
AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS
más métodos.
- Estudiar la morfología de cada colonia.

Introducción
En la naturaleza, la mayoría de los microorganismos no se encuentran aislados, sino integrados
en poblaciones mixtas. Para llevar a cabo el estudio de estos microorganismos y de sus propiedades, es necesario separar unos de otros y trabajar
con especies aisladas, obteniendocultivos axénicos o puros.
Un cultivo axénico o puro es aquel que contiene
un sólo tipo de microorganismo y que procede
generalmente de una sola célula; el crecimiento
de ésta origina, en medio sólido, una masa de
células fácilmente visible que recibe el nombre de
colonia.
Para obtener cultivos axénicos o puros a partir de
una población microbiana mixta, se utilizan las
denominadas técnicas deaislamiento, que fueron
desarrolladas durante el siglo XIX. En un principio,
Lister utilizó diluciones seriadas en medio líquido
con esta finalidad, pero la presencia de contaminación, es decir, de microorganismos no deseados, dificultó el aislamiento. La escuela de Robert
Koch introdujo los medios sólidos, complementados con agar, y las placas de Petri en
Bacteriología, permitiendo así laseparación física
de las colonias sobre la superficie del medio de
cultivo o en el interior del mismo.
El aspecto de las colonias sirve para diferenciar
distintas especies microbianas.

Objetivos
- Familiarizarse con el manejo de microorganismos y con las técnicas de aislamiento en placa de Petri.
- Obtener colonias separadas, utilizando uno o

Carga (1ª estría)

Material
Asa desiembra, cayado, pipeta graduada, placas
de Petri con medio de cultivo sólido y cultivo de
microorganismos.

Técnicas
Existen distintas técnicas que pueden utilizarse:
a) Extensión en superficie con cayado

Serie de
diluciones
conocidas de
la muestra

Cayado

Figura 5.1. Siembra por extensión en
superficie para recuento.
Depositar sobre la superficie de una placa con
agar nutritivo unagota ó 0,1 ml de una determinada dilución del cultivo de microorganismos problema y extenderlo con ayuda del cayado, previamente esterilizado, en todas las direcciones hasta

Primera diseminación

Segunda diseminación

(2ª estría)

(3ª estría)

Última diseminación

(4ª estría)

Figura 5.2. Técnica de aislamiento por estría en superficie.

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que esté completamente seco.Incubar la placa,
en posición invertida, a la temperatura deseada
(durante 24, 48 ó 72 horas) según el tipo de microorganismo. La posición invertida evitará que el
agua de condensación se deposite sobre la superficie del medio, dificultando la obtención de colonias aisladas.
Es una técnica usada para el aislamiento de colonias, que permite igualmente el recuento de bacterias viables en la muestra,si conocemos exactamente el volumen de muestra sembrado.
b) Estría múltiple en superficie
Con un asa de siembra, previamente esterilizada,
se toma una muestra del cultivo de microorganismos y se extiende sobre un área pequeña de la
superficie de la placa con agar nutritivo, en forma
de estrías muy juntas, pero sin hacer presión para
no dañar el agar.
Se flamea el asa, se enfría y después derozar la
siembra realizada previamente, se extiende de
nuevo por otra zona de la placa haciendo nuevas
estrías. Este proceso se repite sucesivamente, flameando y enfriando el asa al comienzo de las
sucesivas siembras en estría. Se lleva la placa a
incubar, a la temperatura adecuada, siempre en
posición invertida.
Mediante esta técnica se obtienen colonias aisladas a partir de una muestraque contenga un elevado número de bacterias.
c) Dilución en masa
En una placa de Petri vacía se deposita un
pequeño volumen conocido de muestra y a continuación se añade el medio de cultivo (agar nutritivo) fundido y atemperado aproximadamente a
45ºC. Se mezclan ambos por rotación suave de la
placa. De esta forma los microorganismos se distribuirán de forma homogénea en el medio de cultivo,...