AISLAMIENTO DE MITOCONDRIAS DE C LULAS ANIMALES

UNIVERSIDAD DE SONORA
DEPARTAMENTO DE INVESTIGASTIGACIONES CIENTIFICAS Y TECNOLOGICAS DE LA UNIVERSIDAD DE SONORA



LABORATORIO DE BIOLOGIA CELULAR
DRA. MARIA BURBOA
PRÁCTICA #6: AISLAMIENTO DE MITOCONDRIAS DE CÉLULAS ANIMALES
ALEJANDRA GUADALUPE PÉREZ RODRÍGUEZ









HERMOSILLO SONORA A 12 DE MARZO DE 2015


RESUMEN:
Al llegar al laboratorio el hígado ya estaba en el hielo listo para sercortado, lo siguiente fue tomar un trozo de tegido y después se peso para asegurarse que pesara 4 gramos, después con ayuda del cuchillo se partió en trozos aun mas pequeños, lo siguiente fue colocarlo en el mortero añadiéndole la cantidad indicada de solución A, tomamos el liquido y lo colocamos dentro de un tubo de centrifugado de 50 ml, se peso y fue directamente a la centrifuga previamentepreparada a una temperatura de 4°C durante 30 minutos a 1000 x g. Despues se tomo un mililitro del liquido ya centrifugado y se coloco dentro de un tubo falcon y se coloco en la centrifuga a 4°C durante 20 minutos a 16, 000 x g, después tiramos el liquido y se coloco una gota de solución B en las mitocondrias presipitadas, para después observar en el mircroscopio.
INTRODUCCIÓN Y ANTECEDENTES:
Lasmitocondrias son organelas del tamaño de las bacterias (miden aproximadamente 1x um) que existen en gran cantidad en casi todas las células eucariotas. Típicamente hay unas 2000 mitocondias por células y juntas ocupan el 25% del volumen celular. Las mitocondrias están rodeadas por dos membranas una externa lisa y una interna fuertemente plegada invaginada o tubular que tiene una gran superficie yencierra la matriz mitocondrial, las invaginaciones de la membrana interna se llaman crestas y las invaginaciones tubulares se llaman tubulos. El espacio que queda entre la membrana interna y membrana externa se conoce como espacio intermembranal.
El numero y la forma de las mitocondrias asi como el numero de su crestas varian mucho de un tipo de célula a otro. Los tejidos con un metabolismo oxidativomuy intenso, como por ejemplo musculo cardiaco tiene mitocondrias con muchas crestas. Las fromas de las mitocondrias dentro de un tejido varian deacuerdo con su estado funcional es decir que son organelas plásticas y móviles. Es probable que las mitocondrias se hayan formado en una fase temprana de la evolución a partir de bacterias aerobias que constituyeron una simbiosis con eucariotasprimitivos de vida anaerobia. Esta teoría endosimbiotica es abalada por numerosos hallazgos. Por ejemplo las mitocondrias poseen su propio DNA de forma anular (4 moléculas por mitocondria y sus propios ribosomas) el genoma mitocondrias fue tornándose cada vez mas pequeño en el curso de la evolución. En el hombre todavía tiene 16569 pares base que codifican 2 RNAr, 22 RNAt y 14 proteinas (generalmentesubunidades de complejos de la cadena respiratoria) son producidas en la mitocondria todas las demás proteínas mitocondriales, son codificadas por el gneoma nuclear y deben ser importadas a las mitocondrias después de la traducción en el citoplasma. Koolman, Jan. (2004).


Aislamiento y estructructura de la mitocondria:
Problablemente el primero en descubrir las mitocondrias fue R. Altman en 1890,las identifico como unas estructuras intracelulares a las que llamo mioblastos. Cuatro años después, banda denomino esas estructutas mitocondrias. En 1900, L. Michaelis encontró que el verde de Jano B teñia las mitocondrias, y durante varios años esta tinción se utilizo para su identificación. También se conjeturo sobre cual podría ser la función de las mitocondrias y algunos investigadorespropucieron que podría estar relacionada con la respiración. Sin embargo las pruebas definitivas sobre la función mitocondrial no se obtuvieron si no hasta que se lograron separar del resto de los componentes intracelulares.
La metodología para separar las mitocondrias se conoce como centrifugación diferencial o fraccionamiento subcelular. Esta técnica se utiliza rutinariamente en paracticamente todos...