Aislamiento De Una Proteína

Objetivos

Prepara una muestra, a partir de clara de huevo para su posterior análisis a través de diferentes pruebas.

Aislar la Albumina de la Clara de Huevo.

Realizar una serie de reacciones de coloración y de precipitación que ilustran varias propiedades físicas y químicas de las proteínas.




















Introducción
Las proteínas son macromoléculascompuestas por unidades de α–aminoácidos que se unen entre sí mediante enlaces peptidicos y que alcanzan un peso molecular igual o superior a 5000 D. Ellas se caracterizan por poseer una composición y secuencia de aminoácidos, un tamaño, una forma y una carga definida.

Diversas propiedades características de las proteínas globulares en solución pueden ser utilizadas para separar mezclas de proteínastales como peso molecular, solubilidad, carga eléctrica, diferencias en las características de adsorción y afinidad biológica por otras moléculas.

La Solubilidad de una proteína en solución acuosa depende de su carga eléctrica neta; esto origina que las moléculas proteicas se repelan electrostáticamente y que el solvente se encuentre organizado alrededor de las moléculas cargadas constituyendouna capa de solvatación y evitando que dichas moléculas proteicas puedan asociarse en complejos insolubles.

Las proteínas pueden ser clasificadas, de acuerdo con su solubilidad en diversos solventes, en:
Albúminas: proteínas solubles en agua y soluciones salinas diluidas. Amplio rango de solubilidad.

Globulinas: proteínas ligeramente solubles en agua, solubles en soluciones salinas.Rango de solubilidad más estrecho.

Prolaminas: proteínas insolubles en agua, pero solubles en soluciones alcohólicas diluidas (etanol)

Glutelinas: proteínas insolubles en agua y etanol, pero solubles en soluciones ácidas y alcalinas diluidas.

La clara del huevo esta constituida principalmente por proteínas (albúminas y globulinas). La albúmina de la clara del huevo es la ovomucina.Agitándose la clara del huevo con agua se consigue separar la ovalbumina (soluble en agua) de la ovomucina (poco soluble en agua).
Cualquier factor que modifique la interacción de la proteína con el disolvente disminuirá su estabilidad en disolución y provocará la precipitación. Así, la desaparición total o parcial de la envoltura acuosa, la neutralización de las cargas eléctricas de tipo repulsivo o laruptura de los puentes de hidrógeno facilitarán la agregación intermolecular y provocará la precipitación. La precipitación suele ser consecuencia del fenómeno llamado desnaturalización.
La desnaturalización consiste en el desenrollamiento de la estructura nativa característica de las proteínas globulares, pasando a una cadena doblada al acaso. La estructura primaria se mantiene inalteradasiendo rotos los enlaces débiles que estabilizan la estructura terciaria nativa de una proteína globular. La ocurrencia de estos fenómenos causa cambios en las propiedades de las proteínas como disminución de la solubilidad y pérdida de la actividad biológica.
La adición de pequeñas cantidades de sales al agua favorece la solubilidad de proteínas como globulinas, en un proceso denominado Salting-ino solubilidad por sales, el cual se debe a las fuerzas de atracción de la proteína y los iones de sal. Por su parte si se incrementa la cantidad de sales se produce una disminución en la solubilidad de las proteínas llamada Salting-out o precipitación salina, originado por la perdida de la capa de solvatación, favoreciendo a la formación de complejos insolubles.
Una proteína desnaturalizadacuenta únicamente con su estructura primaria. Por este motivo, en muchos casos, la desnaturalización es reversible. El proceso mediante el cual la proteína desnaturalizada recupera su estructura nativa se llama renaturalización. En algunos casos, la desnaturalización conduce a la pérdida total de la solubilidad, con lo que la proteína precipita. La formación de agregados fuertemente hidrofóbicos...