Aislamiento, Purificación E Identificación De Adn

Aislamiento, purificación e identificación de ADN
INTRODUCCION
El ADN o Acido Desoxirribonucleico es una macromolécula orgánica que forma parte de todas las células de todos los seres vivos. Es uno de los dos ácidos nucleicos que existen, contiene la información genética de los organismo y de algunos virus; siendo responsable de transmitir esta información a sus descendientes. Desde un punto devista químico el ADN es un polinucleótido, esto quiere decir, Un polímero es un compuesto formado por muchas unidades simples conectadas entre sí, como si fuera un largo tren formado por vagones. Cada vagón es un nucleótido, y cada nucleótido, a su vez, está formado por un azúcar (la desoxirribosa), una base nitrogenada (que puede ser adenina→A, timina→T, citosina→C o guanina→G) y un grupofosfato que actúa como enganche de cada vagón con el siguiente. La forma en que se acomodan estas cuatro bases a lo largo de la cadena determina, como se va a codificar la información genética del organismo, es decir, por estas cuatro bases existe toda la biodiversidad.
En los organismos vivos, el ADN no suele existir como una molécula individual, sino como una pareja de moléculas estrechamenteasociadas. Las dos cadenas de ADN se enroscan sobre sí mismas formando una especie de escalera de caracol, denominada doble hélice. El modelo de estructura en doble hélice fue propuesto en 1953 por James Watson y Francis Crick. El éxito de este modelo radicaba en su consistencia con las propiedades físicas y químicas del ADN, algunas de ellas son su alta viscosidad en soluciones acuosas y su relativafragilidad.
Se observa en este modelo que el grupo fosfato se encuentra en la parte exterior de la molécula a manera de columna vertebral, a este se une la azúcar (desoxirribosa) que a su vez se encuentra unida a una base nitrogenada. Las bases nitrogenadas de cada cadena de ADN interactúan por puentes de hidrogeno y siempre son Adenina-Timina y Citosina-Guanina.
Las secuencias de ADN queconstituyen la unidad fundamental, física y funcional de la herencia se denominan genes. Cada gen contiene una parte que se transcribe a ARN y otra que se encarga de definir cuándo y dónde deben expresarse. La información contenida en los genes se emplea para generar ARN y proteínas, que son los componentes básicos de las células. Dentro de las células, el ADN está organizado en estructuras llamadascromosomas que, durante el ciclo celular, se duplican antes de que la célula se divida. Los organismos eucariotas almacenan la mayor parte de su ADN dentro del núcleo celular; los organismos procariotas (bacterias y arqueas) lo almacenan en el citoplasma de la célula, y, por último, los virus ADN lo hacen en el interior de la cápside de naturaleza proteica.
En esta práctica se busca la presencia deADN en un poco de germen de trigo. Se utiliza este material biológico por que posee una gran cantidad de ADN, después de lisar las células del germen e hidrolizar al ADN; con ayuda de la Difenilamina observaremos la reacción que tiene este reactivo al entrar en contacto con la desoxirribosa.

MATERIAL
• Un Mortero con pistilo
• Dos vasos de precipitados de 250 ml
• Un vaso de precipitados de500 ml
• Un termómetro
• Una probeta de 50 ml
• Dos tubos de ensaye de 16 x 150 mm
• Tres pipetas graduadas de 5 ml
• Dos pipetas graduadas de 1 ml
• Un vidrio de reloj grande
• Diez tubos de ensaye de 13 x 100 mm
• Varilla de vidrio
• Frasco de vidrio con tapa de 150 ml aproximadamente
• Gasas y guantes
MATERIAL BIOLOGICO
• Germen de trigo natural
EQUIPO
• Centrifuga Clínica
•Parrilla de calentamiento
REACTIVOS
• Buffer SAS
• TRIS 0.4 M
• Lauril Sulfato de Sodio al 4% en agua P/V
• EDTA Salino
• Buffer CSC
• Etanol 96o Frio
• DSC (Dilución 1:100 del Buffer CSC)
• Mezcla de SEVAG
• TCA (Ácido Tricloroacético al 10%)
• Difenilamina
PROCEDIMIENTO
1. Extracción: En un mortero se maceraron 5 gramos de germen de trigo natural, esté fue congelado previamente.
2. El...