Aislamiento e identificacion de adn de levadura

AISLAMIENTO E IDENTIFICACION DE ADN DE LEVADURA

OBJETIVO: Aislar ADN de levadura y hacer diferentes pruebas para su identificación.

FUNDAMENTO:
Debido a que el ADN es una molécula muy grandesu aislamiento en forma intacta y sus separación de proteínas y polisacáridos es muy difícil por lo cual, probablemente, lo que se obtenga en la practica sean solo fracciones de ADN con unconsiderable grado de impurezas.

Un método consistente en la rotura de las células de levaduras y su homogenización en presencia de un detergente y gracias a la elevada fuerza iónica del medio (clorurosódico 0.15M) los iones que pueden precipitarlo son secuestrados por el EDTA. Las proteínas se desnaturalizan en gran proporción por agitación por cloroformo en un embudo de decantación, formándoseaglomerados de proteínas y cloroformo por los extremos lipofílicos de aquellas que permiten la separación de buena parte de las proteínas en la interfase del sistema cloroformo: agua, lo que hacedisminuir fuertemente el contenido del extracto del ADN; este se precipita por adición de etanol.

MATERIAS Y REACTIVOS

Instrumental

Balanza analítica

Centrífuga
Estufa o plancha eléctrica osecador de cabello

Material biológico

5 g de levadura

Material de vidrio y otro

Mortero con su mango
Baño maría metálico
Erlenmeyer de 500 ml
Termómetro
Probeta de 50 ml
Varilla devidrio gruesa
Arena lavada con ácido y agua.
2 esferas de vidrio
pulverizador

Reactivos:
100 ml de solución salina de EDTA: NaCl 0.15 M conteniendo EDTA bisódico 0.01 M
5 ml docecil sulfato desodio (SDS) al 25%
20. ml perclorato de sodio 6M
150 ml cloroformo: alcohol iscamílico 24:1
250 ml etanol absoluto o 300ml etanol 95%
10 ml hidróxido de potasio 2 N
20 ml ácido clorhídrico 1 N
10ml molibdato de amonio al 5%
5 ml cloruro estannoso 2% (fresco)
10 ml reactivo de Bial
10 ml ácido tricloroacético 10%
20 ml reactivo de difenilamina
20 ml reactivo de Schiff
20 ml...