Aislamiento e identificación de microorganismos

Instituto Tecnológico de Tijuana
ING. EN NANOTECNOLOGÍA

FUNDAMENTOS DE BIOLOGÍA 2NT3A

Práctica 4
AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN DE MICROORGANISMOS

FUNDAMENTO TEÓRICO
La Microbiología, el estudio de los organismos microscópicos, deriva de 3 palabras griegas: mikros (pequeño), bios (vida) y logos (ciencia) que conjuntamente significan el estudio de la vida microscópica. Losmicroorganismos son diminutos seres vivos que individualmente son demasiado pequeños como para verlos a simple vista. En este grupo se incluyen las bacterias, hongos (levaduras y hongos filamentosos), virus, protozoos y algas microscópicas. Los microorganismos presentan una gran variedad metabólica por lo que en distintos aislados microbianos podemos encontrarnos una amplia variedad de compuestos. Una de lastareas de la Microbiología es desarrollar procedimientos que permitan el aislamiento y selección de microorganismos de interés. A fin de tener éxito, los métodos de selección deben constituir una actividad interdisciplinaria que combine actividades de microbiología, química, bioquímica, ingeniería y bibliográficas. El éxito de un programa de selección depende de la fuente utilizada para laobtención de los microorganismos del método elegido para detectar la actividad deseada. Usualmente se utiliza agar como el medio de cultivo de los microorganismos, ya que éste no es selectivo y, por tanto, pueden crecer cualquier tipo de bacterias. Si se requiere sólo una en específico, entonces se procede a crear métodos de cultivo exclusivos para cada microorganismo.

Fuentes de obtención demicroorganismos
1. Fermentaciones naturales: Vino, pan, queso, materiales en descomposición. 2. Animales y plantas enfermos: Vacunas. 3. Suelo: Es el mayor almacén, pero también el más difícil de manejar ya que se puede encontrar todo tipo de microorganismos y en una concentración de 100 millones por gramo de suelo (gran variedad y cantidad). 4. Colecciones internacionales de cultivos: Para el aislamientode nuevos productos metabólicos, los investigadores intentan aislar cepas a partir de ambientes extremos o poco corrientes con la esperanza de que tales capas sean capaces de producir nuevos metabolitos. Por ejemplo, se están examinando microorganismos de las grandes altitudes, hábitats fríos, aguas marinas, profundidades de los océanos, desiertos, géiseres, campos de petróleo, etc.

La tinciónde Gram es usada para clasificar bacterias sobre la base de sus formas, tamaños, morfologías celulares y reacción Gram (color). A nivel del laboratorio es útil como test para un rápido diagnóstico presuntivo de agentes infecciosos, tanto en muestras como en cultivos en crecimiento, y adicionalmente sirve para valorar la calidad de la muestra clínica. Las bacterias se tiñen gram positivas (+),gram negativas (–) o no se tiñen debido a sus diferencias en la composición de su pared y arquitectura celular. Las bacterias gram (+) tienen una gruesa capa de péptidoglucano y gran cantidad de ácidos teicóicos que no son afectados por la decoloración con alcohol y/o acetona, reteniendo el colorante inicial acomplejado con iodo y visualizándose en distintos grados de tonos desde el violeta al azulclaro, dependiendo de si la naturaleza de su pared celular está intacta o dañada (por tratamientos antibióticos, edad. celular…). Las bacterias gram (–) tienen en su pared celular una delgada capa de péptidoglucano ligada a una membrana externa por moléculas de lipopolisacáridos. Esta membrana externa es dañada por el alcohol y/o acetona de la decoloración, permitiendo que el primer coloranteacomplejado con iodo escape y sea reemplazado por el contracolorante.

OBJETIVOS
‡ ‡ ‡ Aislar microorganismos de una muestra de suelo. Identificación de la morfología bacteriana. Realizar la tinción de gran e identificar los microorganismos como G+ o G-.

MATERIALES Y REACTIVOS
‡ Agar cuenta estándar ‡ Caja petri ‡ Pipetas ‡ Tubos de ensayo ‡ Mechero ‡ Asa de siembra ‡ Agua destilada...