Aislamiento y caracterización de dna

INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL
ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGÍA

LABORATORIO DE GENÉTICA MICROBIANA

PROFESORAS:
Q.B.P. ILSE CALVO VILLARREAL
M. EN C. MARÍA VIRGEN GARCÍA RANGEL

GRUPO:
5QM1

SECCIÓN: 2

EQUIPO: 10

INTEGRANTES:
DEL CASTILLO ARENALES ANA ISABEL
RUIZ CONTRERAS DIANA EDITH
SÁNCHEZ VÁZQUEZ MÓNICA EDITH

AISLAMIENTO YCARACTERIZACIÓN DE DNA

INTRODUCCIÓN
Las unidades monoméricas del DNA son los cuatro desoxirribonucleósidos monofosfatos; constituidos por una base nitrogenada pudiendo ser una purina (adenina, guanina) o una pirimidina (timina o citosina), un azúcar (desoxirribosa) y un grupo fosfato. La proporción y orden de colocación o secuencia de estos nucleótidos varían mucho entre especies diferentes.Figura 1. a) Estructura química de las bases nitrogenadas del DNA y RNA; b) estructura química de los azúcares del DNA y el RNA3
En 1953 Watson y Crick propusieron un modelo tridimensional del DNA. Según este modelo, el DNA está formado por dos cadenas antiparalelas de polidesoxirribonucleótidos; es decir, el extremo 5´ (correspondiente al fosfato) queda enfrente al extremo 3’ (correspondiente alOH del azúcar) de la otra. Las dos cadenas se unen por puentes de hidrógeno que se establecen de manera específica o complementaria entre las bases de las dos cadenas. Una molécula de adenina se une por dos puentes de hidrógeno a una timina, y una molécula de guanina se une por tres puentes de hidrógeno con una citosina2.
Figura 2. La doble hélice3. Una vuelta completa abarca 10 pares de bases ycubre una distancia de 34 Å. Los pares de bases están espaciados a 3.4 Å uno de otro. El diámetro interior es de 11 Å, y el exterior de 20 Å. Los signos negativos a lo largo de la cadena representan los grupos fosfato con carga negativa.
Las dos cadenas, además de unirse de manera complementaria y de ser antiparalelas, giran a la derecha formando una hélice, en la cual, cada vuelta presenta unaaltura de 3.4 nm y contiene 10 pares de bases; el diámetro de la hélice es de 2 nm. En la parte exterior de la hélice se encuentran las moléculas de desoxirribosa y fosfato, mientras que las bases se proyectan perpendicularmente hacia el interior.
Resumiendo lo anterior, el DNA es un biopolímero de alto peso molecular, lineal, bicatenario helicoidal, antiparalelo complementario; formado pordesoxirribonuceótidos unidos mediante enlaces fosfodiéster.
Propiedades físicas de la molécula de DNA1

* Viscosidad:
El DNA es una molécula muy grande y por lo tanto, muy frágil. Las soluciones de fragmentos largos de DNA son muy viscosas a consecuencia del tamaño grande de las moléculas; esta viscusidad disminuye al disminuir el tamaño de los fragmentos en solución, ya sea porque se utilicenmétodos energéticos de extracción, al agitar mecánicamente o al tratar con ultrasonido la molécula de DNA.

* Desnaturalización.
Es el proceso mediante el cual se rompen los puentes de hidrógeno que unen a las cadenas complementarias, por lo tanto, las cadenas se separan, se produce cuando se introducen condiciones drásticas como un pH elevado o altas temperaturas.

El DNA también puededesnaturalizarse con compuestos que interfieren con la formación de puentes de hidrógeno como son la formamida, el dimetil sulfóxido o algunas sales como el perclorato. La reacción de desnaturalización puede seguirse, midiendo la absorbancia de luz ultravioleta, ya que las bases, al separarse las cadenas de DNA quedan más libres y absorben más luz ultravioleta (efecto hipercrómico).

La temperaturade fusión (Tm), es la temperatura necesaria para desnaturalizar la mitad del ADN de una mezcla (punto medio de la reacción ADN doble hélice  ADN hélice sencilla) está directamente relacionada con el contenido en G+C, a mayor contenido en G+C mayor temperatura de fusión (Tm).

* Renaturalización:
El DNA que se desnaturaliza por calor, tiende a formar nuevamente la doble cadena cuando la...