Aislamiento y recuento de v. parhaemolyticus

AISLAMIENTO Y RECUENTO DE V. PARHAEMOLYTICUS

I. MATERIAL Y APARTATOS
1. Lo necesario para la preparación y dilución de homogenizados de alimentos.
2. Placas de Petri de vidrio de 100 x 15mm o de plástico de 90 x 15 mm.
3. Estufa a 35-37°C.
4. Baño de agua o estufa de aire para mantener el medio con agar templado a 44-46°C.
5. Aguja deinoculación con asa de 3mm, preferentemente de nicrom o de platino-iridio.
6. Agua de peptona para diluciones con 3% NaCl, en matraces o botellas con 450mL.
7. Caldo salino-polimixinaB, en tubos de 150 x 15mm con 10 mL cada uno.
8. Agar tiosulfato citrato sales biliares (agar TCBS), para lacas,
9. Caldo bismuto sulfito sal, en tubos de 150 x 15mm, con 10mL cada uno.II. TÉCNICA
1. Preparar las muestras de alimento por uno de los tres métodos de preparación y dilución de los homogeneizados de alimentos, utilizando agua de peptona para diluciones con 3% de NaCl como medio de dilución en vez de agua de peptona o agua peptona salina.
2. Preparar tubos de caldo salino polimixina B para el método del número más probable, tres tubos por dilución,inoculando alícuotas de 1mL de las diluciones 10-1, 10-2, 10-3 y 10-4. Incubar los tubos a 35-37°C durante una noche (15-24 horas).
3. Sembrar en estría en asa de las tres diluciones m{as altas de caldo salino polimixina B que presenten creamiento. Sobre placas de agar tiosulfato citrato sales biliares sacarosa. Si se duda acerca del crecimiento, sembrar las tres primeras diluciones.Incubar las placas a 35-37°C durante 18 horas.
4. En el agar tiosulfato citrato sales biliares sacarosa las colonias de V. parahaemolyticus son redondas, de 2-3mm de diámetro, con centro azul o verde. Las colonias de V. alginolyticus aparecen mayores y amarillas. Los coliformes, Proteus y estreptococos aparecen como colonias pequeñas y translúcidas.
5. Cuando las coloniasazul-verdes en las placas de agar tiosulfato citrato sales biliares sacarosa han sido identificados como V. parahaemolyticus, aplicar la tabla de NMP para el cálculo final del número de microorganismos.
6. Cuando se sospeche que el número de células de V. parahaemolyticus va a ser pequeño, enriquecer pasando 5mL de la dilución 10-1 a 10mL de caldo bismuto sulfito sal e incubar a 35-37°C durante 16horas.
7. Agítese el cultivo enriquecido y siémbrese en estría un asa en la superficie de placas de agar tiosulfato citrato sales biliares sacarosa. Incubar las placas a 35-37°C durante 18-24 horas. Examinar las colonias sospechosas bioquímicamente tal como se describe, y si es necesario realizar la tipificación serológica.
8. El cultivo de enriquecimiento no es necesario parael aislamiento de V. parahaemolyticus a partir de muestra fecales tomadas de pacientes durante el estado de diarrea aguda.

IDENTIFICACIÓN DEL V. PARAHAEMOLYTICUS

I. MATERIAL Y APARATOS

1. Placas de Petri de cristal de 100 x 15mm o de plástico de 90 x15mm.
2. Aguja de inoculación, preferiblemente de alambre de nicrom o de paltino-iridio.
3. Baño de agua oestufa de aire para mantener el agar templado a 44-46°C.
4. Estufas de incubación a 27-29°C y a 35-37°C y baño de agua a 41-43°C
5. Frigorífico a 3-5°C.
6. Agar hierro triple azucar sal, distribuido en tubos hasta alcanzar una altura de 7-8cm por tubo.
7. Caldo tripticasa soja con 3% de NaCl, distribuidos en tubos de 150 x 15mm, 7 a 10mL en cada uno.
8.Agar tripticasa soja con 3% de NaCl, en placas e inclinado en tubos.
9. Agar par aprueba de motilidad con 3% NaCl, en tubos de 150 x 15mm, 7-10mL en cada tubo
10. Caldos salinos (3% NaCl) arginina dihidrolasa y lisina descarboxilasa, en tubos de 100 x 13mm, 3mL en cada uno.
11. Caldo salino (con 3% de NaCl) control para arginina dihidrolasa y lisina descarboxilasa, en...