Aislamiento Y Titulacion De Fagos
Páginas: 5 (1018 palabras)
Publicado: 6 de junio de 2012
AISLAMIENTO Y TITULACIÓN DE FAGOS.
Objetivo.
a) a) Describir el ciclo lítico de un bacteriófago.
b) Realizar una cuantificación de bacteriófagos por el método de formación de placas.
Introduccion.
Un bacteriófago es, ante todo, un parásito bacteriano. Un fago puede persistir por si mismo pero no es capaz de crecer ni de reproducirse excepto dentro de una célula bacteriana.
Lamayoría de los fagos poseen genes que codifican para una variedad de proteínas, sin embargo todos los fagos conocidos usan de la célula huésped los ribosomas, factores para síntesis de proteínas aminoácidos y sistemas generadores de energía. El hecho de que utilice el sistema generador de energía del huésped indica que un fago sólo puede crecer en una bacteria metabólicamente activa.
Cadafago debe ejecutar funciones mínimas para garantizar su sobrevivencia:
1. Proteger sus ácidos nucleicos de agentes químicos ambientales que pudieran alterar la molécula.
2. Introducir su ácido nucleico al interior de la bacteria.
3. Convertir una bacteria infectada en un sistema productor de fagos que produzca una gran cantidad de progenie fágica.
4. Liberar la progenie fágica de la bacteriainfectada.
Estos problemas se resuelven de una variedad de formas, de acuerdo a las diferentes especies de fagos. Todos estas especies tienen ciertas características en común pero también diferencias en detalle muestran los varios caminos en los cuales las funciones biológicas específicas pueden llevarse a cabo.
Una observación importante es el grado en el cual una partícula fágicaindividual usa una parte de la maquinaria de la célula. Algunas especies fágicas tienen menos de 10 genes y usan casi todas las funciones celulares, mientras que otras tienen de 30 a 50 genes y son menos dependientes de la célula huésped.
Hay 3 clases básicas de estructuras fágicas:
Icosahédrica sin cola, cabeza icosahédrica con cola y filamentosa; hay muchas variaciones de la estructura básicadel fago con cola, por ejemplo: la longitud y anchura de la cabeza puede ser la misma, o la longitud puede ser mayor que la anchura. La cola puede ser muy corta, etc.
El ciclo de vida de un fago puede ser lítico o lisogénico:
Un fago en el ciclo lítico convierte una célula infectada en una fábrica de fagos y se producen muchos fagos. Un fago capaz de producir solamente el ciclo lítico sedenomina virulento. En el ciclo lisogénico no se producen partículas fágicas, el DNA fágico normalmente llega a formar parte del cromosoma bacteriano (profágo). A este tipo de fago se le llama temperado.
El ciclo de vida lítico básico consiste de lo siguiente:
a). Adsorción del fago a receptores específicos de la superficie de la bacteria.
b). Introducción del DNA del fago al interiorde la bacteria.
c). Conversión de la bacteria infectada en una célula productora de fagos.
d). Producción de proteínas y ácidos nucleicos fágicos.
e). Ensamble de partículas fágicas.
f). Liberación de fagos.
Este fenómeno puede detectarse macroscópicamente por el método de formación de placas.
Cuando se siembra un número suficiente de bactérias sobre la superficie de una caja de agarnutritivo, éstos forman una capa uniforme después de algunas horas de incubación. Si se introducen fagos, éstos pueden entrar al ciclo lítico. Al liberarse nuevos fagos, estos infectan a las bacterias vecinas, de tal manera que después de varios ciclos, pueden verse pequeños aclaramientos o placas sobre la superficie de la capa bacteriana. Dado que el número de placas es directamente proporcionalal número de fagos, este método es de utilidad para la detección y cuantificación de fagos.
MATERIAL BIOLÓGICO.
• Aguas negras.
• Cultivo de Escherichia coli K-12 cepa W3110.
• Lisado fago lambda vir (Equipos testigo).
MATERIAL DE LABORATORIO.
• 1 pipeta de 5 mL.
• 8 pipetas de 1 mL estériles.
• 1 tubo de 13x100 mm estériles.
• 1 tubo de 13x100 mm con 2...
Objetivo.
a) a) Describir el ciclo lítico de un bacteriófago.
b) Realizar una cuantificación de bacteriófagos por el método de formación de placas.
Introduccion.
Un bacteriófago es, ante todo, un parásito bacteriano. Un fago puede persistir por si mismo pero no es capaz de crecer ni de reproducirse excepto dentro de una célula bacteriana.
Lamayoría de los fagos poseen genes que codifican para una variedad de proteínas, sin embargo todos los fagos conocidos usan de la célula huésped los ribosomas, factores para síntesis de proteínas aminoácidos y sistemas generadores de energía. El hecho de que utilice el sistema generador de energía del huésped indica que un fago sólo puede crecer en una bacteria metabólicamente activa.
Cadafago debe ejecutar funciones mínimas para garantizar su sobrevivencia:
1. Proteger sus ácidos nucleicos de agentes químicos ambientales que pudieran alterar la molécula.
2. Introducir su ácido nucleico al interior de la bacteria.
3. Convertir una bacteria infectada en un sistema productor de fagos que produzca una gran cantidad de progenie fágica.
4. Liberar la progenie fágica de la bacteriainfectada.
Estos problemas se resuelven de una variedad de formas, de acuerdo a las diferentes especies de fagos. Todos estas especies tienen ciertas características en común pero también diferencias en detalle muestran los varios caminos en los cuales las funciones biológicas específicas pueden llevarse a cabo.
Una observación importante es el grado en el cual una partícula fágicaindividual usa una parte de la maquinaria de la célula. Algunas especies fágicas tienen menos de 10 genes y usan casi todas las funciones celulares, mientras que otras tienen de 30 a 50 genes y son menos dependientes de la célula huésped.
Hay 3 clases básicas de estructuras fágicas:
Icosahédrica sin cola, cabeza icosahédrica con cola y filamentosa; hay muchas variaciones de la estructura básicadel fago con cola, por ejemplo: la longitud y anchura de la cabeza puede ser la misma, o la longitud puede ser mayor que la anchura. La cola puede ser muy corta, etc.
El ciclo de vida de un fago puede ser lítico o lisogénico:
Un fago en el ciclo lítico convierte una célula infectada en una fábrica de fagos y se producen muchos fagos. Un fago capaz de producir solamente el ciclo lítico sedenomina virulento. En el ciclo lisogénico no se producen partículas fágicas, el DNA fágico normalmente llega a formar parte del cromosoma bacteriano (profágo). A este tipo de fago se le llama temperado.
El ciclo de vida lítico básico consiste de lo siguiente:
a). Adsorción del fago a receptores específicos de la superficie de la bacteria.
b). Introducción del DNA del fago al interiorde la bacteria.
c). Conversión de la bacteria infectada en una célula productora de fagos.
d). Producción de proteínas y ácidos nucleicos fágicos.
e). Ensamble de partículas fágicas.
f). Liberación de fagos.
Este fenómeno puede detectarse macroscópicamente por el método de formación de placas.
Cuando se siembra un número suficiente de bactérias sobre la superficie de una caja de agarnutritivo, éstos forman una capa uniforme después de algunas horas de incubación. Si se introducen fagos, éstos pueden entrar al ciclo lítico. Al liberarse nuevos fagos, estos infectan a las bacterias vecinas, de tal manera que después de varios ciclos, pueden verse pequeños aclaramientos o placas sobre la superficie de la capa bacteriana. Dado que el número de placas es directamente proporcionalal número de fagos, este método es de utilidad para la detección y cuantificación de fagos.
MATERIAL BIOLÓGICO.
• Aguas negras.
• Cultivo de Escherichia coli K-12 cepa W3110.
• Lisado fago lambda vir (Equipos testigo).
MATERIAL DE LABORATORIO.
• 1 pipeta de 5 mL.
• 8 pipetas de 1 mL estériles.
• 1 tubo de 13x100 mm estériles.
• 1 tubo de 13x100 mm con 2...
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