aislamiento

Trabajo Practico N°3
Aislamiento de distintos microorganismos

Introducción
Con el objetivo de obtener cultivos puros de representantes de distintos grupos bacterianos a partir de distintas muestras, se deben llevar a cabo distintas “marchas de aislamiento”, las cuales difieren en base a las características metabólicas y las condiciones de crecimiento óptimas para cada especie.
MetodologíaA partir de distintas muestras, se inoculan fracciones en diversos caldos de enriquecimiento, que pueden o no ser selectivos, a fin de aumentar el número del microorganismo de interés respecto del total presente en las muestras. Luego de una incubación a temperatura y tiempo adecuados, se toma un inóculo de cada caldo y se siembra, ya sea por estriado o rastrillado, en un medio sólidodiferencial, que puede además ser selectivo, con el objeto de obtener colonias aisladas. Finalmente, se repican aquellas colonias cuyas características coincidan con las esperadas para el microorganismo de interés y se siembran en diversos medios sólidos a modo de obtener cultivos puros del mismo.
Enterobacterias (E. Coli)
Las E. Coli son bacterias conocidas por colonizar el tracto intestinal de lamayoría de los animales, incluyendo el humano, por lo tanto, una muestra de aguas negras sería ideal para encontrar a este microorganismo, aunque se debería poder encontrar en cualquier muestra de agua no potable, ya que las E. Coli son ubicuas.
Para poder aislar bacterias E. Coli, debemos saber que estas son bacterias capaces de fermentar lactosa, por lo cual se usa el caldo Mac Conkey. Este caldoestá compuesto por peptona, lactosa, bilis de buey y purpura de bromocresol., la peptona es la fuente de aminoácidos y de otros factores de crecimiento, la lactosa es el hidrato de carbono fermentable, la bilis de buey estimula el crecimiento de las bacterias coliformes e inhibe a gran parte de la flora gram positiva (las E. Coli son gram negativas), y el púrpura de bromocresol es el indicador depH. Los coliformes, son microorganismos que fermentan la lactosa, con producción de ácido y gas. Al acidificar el medio, se produce un viraje del indicador de pH del color púrpura al amarillo. Además, la producción de gas de estas bacterias al fermentar se puede usar como indicador de su presencia mediante el uso de una campanita de Durham. Esta campanita es un tubo que se coloca invertido dentrodel tubo con el caldo Mac Conkey que atrapa el gas producido por las bacterias al fermentar. Por lo tanto, al pasar el tiempo de incubación, se debería ver una burbuja dentro de la campanita de Durham, indicando la presencia de coliformes.
Luego, de la incubación, se toma una alícuota con un ansa, y se estría la muestra sobre agar EMB. Este agar está compuesto de peptona, lactosa, sacarosa,fosfato dipotásico, agar, eosina y azul de metileno. Los últimos dos son indicadores que permiten diferenciar entre microorganismos capaces de metabolizar lactosa y/o sacarosa, y aquellos incapaces de hacerlo. E Coli debería presentar un brillo metálico característico con un centro oscuro y una periferia azul o rosada. Este medio es tanto un medio diferencial como un medio de purificación.

Bacillusspp.
Las bacterias del genero Bacillus suelen estar presentes en el suelo, agua de mar, ríos y en alimentos, los cuales contaminan, y algunas especies son patogénicas. Por esto mismo, se podría tomar una muestra tanto de tierra, como de agua de rio o algún alimento. Bacillus cereus es una especie conocida por causar la intoxicación por medio de ingestión de arroz contaminado.
Tomando una muestrade arroz, se mezcla una cantidad prudente en solución fisiológica estéril, y se calienta a 80˚C durante 5 minutos. Este paso aprovecha que los Bacillus son bacterias capaces de esporular. Una vez que se somete a la muestra a temperaturas tan altas, estas bacterias producen esporas, estructuras de resistencia, que son capaces de sobrevivir en estas condiciones a diferencia del resto de los...