Aislamientos de aminoacidos




BIOQUIMICA.
TEMA:
METODOS DE DETERMINACIÓN DE AMINOÁCIDOS

A 27 DE FEBRERO DE 2014, TORREÓN COAH., MÉX
IDENTIFICACIÓN DE AMINOÁCIDOS Y PROTEÍNAS.
Un gran número de reacciones son utilizadas para la detección de proteínas. Debido a la complejidad de las moléculas proteicas y a la dificultad de obtenerlas en forma pura y aislada, estas pruebas son usadas sabiendo que identificangrupos químicos específicos de la molécula de proteína, ó más general todavía, para las cadenas laterales de los aminoácidos — encontrados en todas las proteínas. Así, el reactivo de Millón da una reacción positiva cuando reacciona con los grupos fenoles de los aminoácidos presentes en las proteínas.

METODOS CUALITATIVOS
PRUEBA DE MILLON; Esta prueba nos permite detectar compuestos con radicalhidroxibenceno como el aminoácido tirosina ó sus derivados; así cono proteínas que lo contengan (albúmina). El reactivo de Millón es una mezcla de nitritos y nitratos mercúricos los cuales ocasionan la mercuración y nitración ó nitrosación del grupo fenólico de los aminoácidos libres ó presentes en proteínas, generando un precipitado blanco que por la acción del calor, tema un color rosado ó rojoladrillo.
PRUEBA XANTOPROTEICA: Mediante esta prueba cualitativa podemos identificar aminoácidos que contienen anillos aromáticos ó heterociclicos en su molécula ó proteínas que los contengan; aunque el anillo bencénico de la fenilalanina no tiene suficiente capacidad para tornar positiva la prueba. Cuando los aminoácidos con la característica estructural- ya mencionada, se calientan en presenciade ácido nítrico concentrado, producen compuestos nitrados de color amarillo, a los cuales el álcali como el NaOH ó NH4OH, convierten en sus sales respectivas de color naranja.
PRUEBA DE BIURET: Este ensayo nos permite detectar compuestos que poseen dos ó más enlaces peptídicos.- Cuando estas sustancias se tratan con soluciones- de sulfato de cobre disuelto en solución alcalina (Reactivo deBiuret), dan un color violeta característico. El color desarrollado es debido aparentemente al Complejo de coordinación formado entre el átomo de cobre del Reactivo de Biuret, y cuatro átomos de nitrógeno peptídicos presentes en las cadenas polipeptídicas cono se ejemplifica enseguida:

La intensidad del color generado es una medida cuantitativa del numero de enlaces peptídicos presentes en lamolécula. Esta prueba no es especifica exclusivamente para detectar enlaces peptídicos, ya que cualquier compuesto que contenga dos grupos carbonilos unidos por un átomo de nitrógeno o de carbono, da también un resultado positivo, Así. El compuesto conocido como biuret (H2NCO- NH-CONH2) da una reacción positiva .

REACCION DE HOPKINS-COLE: Esta prueba es específica para laidentificación de triptófano libre ó presente en proteínas. El reactivo de Hopkins Colé es una disolución de ácido glióxilico en agua, aunque el ácido acético glacial expuesto a la luz contiene también ácido glioxílico y se puede emplear en la prueba. Cuando una solución de triptofano ó de proteína se trata con el Reactivo anterior, y luego se permite la estratificación de ácido sulfúrico; en la zona de Ínterfase se genera un anillo purpura ó rojo violeta resultante de la condensación del grupo carbonilo del ácido glioxílico y al anillo indol del triptofáno:
HC = O
+ ___ CH2- CH- COOH H2S04 COMPLEJO DE
COOH NH 2COLOR PURPURA
Acido Glioxílico Triptofano O ROJO VIOLETA

REACCION DE LA NINHIDRINA: Esta prueba permite identificar compuestos que poseen grupos amino libres como son todos los alfa aminoácidos, aminas primarias y amoniaco. Al añadir ninhidrina a una...