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CROMATOGRAFÍA LIQUIDA DE ALTA RESOLUCION

Se puede obtener grandes aumentos en la eficiencia de una columna por medio de una disminución en el tamaño de la partícula de los empaques.
A finales de los sesentas se desarrollo una tecnología que permitía producir partículas de diámetros tan pequeños como 10 micrómetros. Esta tecnología requiere de instrumentos complejos que contrastannotablemente con los simples dispositivos empleados en la cromatografía líquida clásica.
A veces se utiliza el nombre de cromatografía líquida de alto rendimiento (High perfomance liquid chromatography), para distinguir estos nuevos procedimientos de los métodos clásicos.
La cromatografía de líquidos de alta resolución (HPLC) es, dentro de las técnicas cromatográficas, la más utilizada. El proceso deseparación cromatográfica puede definirse como la transferencia de masas entre una fase estacionaria y una móvil. La mezcla que contiene los compuestos a separar es disuelta e inyectada en una columna rellena de fase estacionaria a través de la cual es forzada a pasar por una fase móvil impulsada por la bomba de alta presión. Dentro de la columna la mezcla se separa en sus componentes en funciónde su interacción entre las dos fases. Esta separación puede ser modificada eligiendo adecuadamente tanto la fase móvil como la estacionaria, el flujo de la fase móvil o la temperatura de la separación. De esta forma la técnica de HPLC adquiere un alto grado de versatilidad difícil de encontrar en otras técnicas, siendo capaz de separar los componentes de una gran variedad de mezclas.
La HPLC esuna técnica muy sensible, idónea para separaciones de especies no volátiles y termolábiles y sobre todo, su gran aplicación a sustancias que son de primordial interés en la industria, en muchos campos de la ciencia y para la sociedad en general, como: aminoácidos, proteínas, ácidos nucleicos, hidrocarburos, carbohidratos, drogas, terpenoides, plaguicidas, antibióticos, esteroides, especiesorganometálicas y una cierta variedad de sustancias inorgánicas.

PARTES DE UN INSTRUMENTO DE HPLC

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* Reservorio para el disolvente y sistema para desgasificarlo.- Un aparato moderno de cromatografía líquida de alto rendimiento, esta equipado con uno o mas reservorios de vidrio o acero inoxidable con capacidad para uno o mas litros de disolvente. A menudo estos recipientes estánequipados con un medio para extraer los gases disueltos, por lo general, oxígeno y nitrógeno, que interfieren formando burbujas en la columna y en el sistema de detección y pueden causar el ensanchamiento de las bandas, además suelen interferir en el funcionamiento del detector.
Los desgasificadores pueden consistir en un sistema de bomba de vacío, un sistema de destilación o un dispositivo paracalentar y agitar el disolvente.
Elección del Solvente
Características:
o Pureza y Estabilidad. En la actualidad se cuenta con productos de calidad de pureza cromatográfica. Bajo contenido de impurezas.
o Disolver la muestra
o Miscible con otros solventes para formar mezclas útiles
o No degradar o disolver la fase estacionaria
o Tener bajaviscosidad para reducir las caídas de presión
o Ser compatible con el detector utilizado. Transparencia óptica (cuando se usan detectores UV).
Programación del Solvente
Existen dos métodos de programación de Solvente en HPLC:
o Elución Isocrática: Separación en la que se utiliza solamente un disolvente.
o Elución en gradiente. Es un término que se utiliza paradescribir el proceso mediante el cual se cambia la composición de la fase móvil. Se utilizan dos y a veces más disolventes que difieren significativamente en su polaridad. Los equipos modernos suelen estar equipados con dispositivos que introducen los disolventes de dos o más recipientes en una cámara de mezcla a velocidades que pueden variarse en forma continua.

* Bomba.- La mayoría de las bombas...